[发明专利]人夏科－莱登晶体5及其编码序列,以及制法和用途

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人夏科-莱登晶体5(Charcot-Leyden Crystal 5,CLC5)的cDNA序列，该cDNA编码的蛋白是人夏科-莱登晶体蛋白的同系物。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

夏科-莱登晶体(Charcot-Leyden Crystal,CLC)是自然存在于人体组织和分泌物中的底面为六角的双锥体形晶体，与寄生过程、过敏性过程中外周血或组织中的嗜酸细胞数量增加有关。早在1854年，Charcot和Robin首先在尸体的血液和白血病患者的脾脏中发现夏科-莱登晶体(Charcot,J.M.;Robin,C.:C.R.Seances Mem.Soc.Biol.Paris 5:44-52,1854)，后来在一位哮喘病患者的唾液中亦发现了该晶体(Leyden,E.Virchows Arch.Path.Anat.54:324-344,1872)。

CLC在嗜酸细胞相关炎症反应的组织和分泌物中被观察到，这些炎症反应有哮喘，骨髓性白血病，过敏反应，寄生虫病等(Beeson,P.B.1977 et al.The eosinopilIn Problems in the Internal Medicine,Vol.15.;Ottesen,E,A.et al 1978.The eosinophil,eosinophilia and eosinophil-related disorders.In Allergy:Principles and Practice,Vol.2.E.Middleton,C.E.Reed,and E.F.Ellis,eds.C.V.Mosby Co.,St.Louis,MO,p.584.)。CLC蛋白占嗜酸细胞总蛋白的约10％(Weller,P.F.et al.1984,J.Biol.Chem.259:15100)，是嗜酸细胞的标志性蛋白，在体液和分泌物中鉴定到这种独特的底面为六角的双锥体形晶体—CLC晶体，可作为嗜酸细胞相关的过敏性炎症的标志。

CLC的全长cDNA序列在1993年分离得到，该cDNA序列长598bp，编码142氨基酸的多肽(Ackeman,S.J.et al 1993,J.Immun.150:456-468)。CLC的基因组序列几乎同时被获得，Dyer报道从特异的19号染色体库中克隆到包含了CLC编码序列的基因组片段，对CLC的cDNA和基因组序列分析结果显示CLC的编码顺序由4个外显子拼接而成(Dyer,K.D.et al.1997,Genomics 40:17-221)。

Mastrianni将人夏科-莱登晶体蛋白定位于19号染色体(Mastrianni,D.M.et al1991,Cytogenet.Cell Genet.58 2021)。荧光原位杂交技术将CLC进一步定位于19q13.1(B.Trask and H.Morhrenweiser unpublished observation,cited in Ackeman,S.J.et al 1993,J.Immun.150:456-468)。

另有一些实验显示夏科-莱登晶体作为一个独立的蛋白具有溶血磷脂酶的活性(Gleich,G.J.et al 1976,J.Clin.Invest.57:633-640;Weller,P.F.et al 1980,Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.77;7441-7443)。这一结论同时也被其它一些实验所支持：碱性聚丙烯酰胺胶电泳显示，溶解的夏科-莱登晶体只有一条条带，且其分子量为17400，与从嗜酸性颗粒细胞中分离到的溶血磷脂酶的分子量相符；另外，嗜酸性颗粒细胞溶血磷脂酶能形成双锥型的晶体，与夏科-莱登晶体形态相同。这些都表明，人嗜酸粒细胞溶血磷脂酶是夏科-莱登晶体的组成成分(Weller,P.F.et al 1980,Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.77;7441-7443)。但CLC与其它哺乳动物的溶血磷脂酶没有结构上的相似性(Leonidas,D.D.et al.1995,Structure 3:1379-1393)。