[发明专利]用新的复性方法制备组织型纤溶酶原激活剂重组异构体无效
申请号: | 99120415.8 | 申请日: | 1999-12-13 |
公开(公告)号: | CN1299822A | 公开(公告)日: | 2001-06-20 |
发明(设计)人: | 王革 | 申请(专利权)人: | 王革 |
主分类号: | C07K14/00 | 分类号: | C07K14/00;C12N15/09;C12P21/00 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 250013 山东省*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 复性 方法 制备 组织 型纤溶酶原 激活剂 重组 异构体 | ||
1、用一种新的复性方法制备组织型纤溶酶原激活剂39KD重组异构体(r-PA)。其特征在于在变性r-PA的复性体系中加入二硫键异构酶,以提高r-PA的复性率。
2、组织型纤溶酶原激活剂39KD重组异构体(r-PA)的制备工艺,其特征在于经过工程菌表达→菌体破碎→包含体分离→变性→PDI催化复性→脱盐→亲和层析→阳离子交换层析等步骤完成。
3、如权利要求2所述的组织型纤溶酶原激活剂39KD重组异构体(r-PA)的变性,其特征在于用盐酸胍作为变性剂,变性体系含6M盐酸胍,20~100mM Tris,10~100mM DTT,pH7~10。
4、如权利要求2所述的PDI催化的组织型纤溶酶原激活剂39KD重组异构体(r-PA)的复性,其特征在于PDI为重组人PDI或其它来源的PDI,r-PA与PDI的摩尔比为100∶1~10∶1。
5、如权利要求2所述的阳离子交换层析,其特征在于采用CM-Sepharose阳离子交换柱,洗脱条件是0~1M NaCl,pH7~10,最佳洗脱浓度是0.2~0.3M NaCl。
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