[发明专利]一种新的多肽——人含ATP/GTP结合结构域的EF－手型钙结合蛋白96和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽－人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞液中钙离子浓度的变化引起了广泛的细胞反应。细胞内的钙结合蛋白是通过酶反应或蛋白与蛋白相互作用调节来传导钙信号中的关键分子。它们中的一些在细胞周期中作用，或作用于细胞分化。被第二信号分子(如肌醇三磷酸)刺激后，它们短暂地从内质网释放到周围的细胞质中。相似的生理过程在核膜破裂和有丝分裂后期的染色单体分离中亦发生。

许多钙结合蛋白均属于同一进化家族，且含有一共同的钙结合结构域，即EF-手型结构域。这些蛋白构成了一很大的蛋白家族，即EF-手型钙结合蛋白家族。该蛋白家族的成员分布非常广泛，这些蛋白均在细胞生长及分化过程中起重要的作用，调控着细胞循环及控制着生物体的新陈代谢过程。

EF-手型结构域包含一个12个氨基酸残基组成的环，这个环通过一个12个氨基酸残基的α螺旋区域向两边伸展，组成约成90度的角。在EF-hand环中，钙离子结合于一个五边形的双锥状的构象中。涉及结合的6个残基在1，3，5，7，9和12位。12位上保守的Glu或Asp提供与Ca配位的两个氧原子(双配位基配体)。

EF-手型钙结合蛋白在该家族中的分布较多，该类钙结合蛋白具有如下保守的一致性序列片段：[LIVMFYW](2)-X(2)-[LK]-D-X(3)-[DN]-X(3)-[DNSG]-[FY]-X-[ES]-[FYVC]-X(2)-[LIVMFS]-[LIVMF]；所有EF-手型钙结合蛋白均具有这一一致性序列片段，而非EF-手型的蛋白中不含有这一序列片段。该序列片段包含有EF-手型的高亲和区域，但这一位点不具备钙结合特征。其不是蛋白与钙结合的中心位点，但在生物体内调节着蛋白与钙离子的亲和作用。

ATP或GTP结合基序是各种ATP/GTP结合蛋白中普遍存在的结构域，一些连接ATP或GTP的蛋白都或多或少含有这一保守的motif序列，该基序具有保守的特征性序列片段：[AG]-X(4)-G-K-[ST](其中X为任意氨基酸残基)。这些motif中最为保守的是glycine富集区域，这一区域在β线与α螺旋之间形成一个易弯曲的环。这一弯曲环通常与核苷酸上的某一磷酸基团反应，该motif序列通常被称为“A”共有序列或P环。该基序在生物体内通常负责与ATP、GTP结合，为蛋白发挥生物学功能提供所需的能量及稳定蛋白在生物体内的结构，协助蛋白完成其正常的生理学功能。其表达异常将直接导致一些蛋白的异常表达及功能异常，从而引发各种相关的疾病，如发育紊乱、肿瘤及癌症的发生等。

本发明的新的人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96也含有EF-手型钙结合蛋白的保守的EF-手型一致性序列片段，同时，还含有ATP/GTP结合结构域，因而，其为人钙结合蛋白家族的新成员，且与该蛋白家族的其它成员具有相似的生物学功能。该蛋白在生物体内调控着细胞的生长及分化，并调节着生物体的新陈代谢过程。其表达异常将引发各种相关的发育紊乱症、各组织的代谢紊乱症及一些神经系统的疾病。由于如上所述人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽－人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽－人含ATP/GTP结合结构域的EF-手型钙结合蛋白96的抗体。