[发明专利]一种新的多肽——人凝血栓蛋白30和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人凝血栓蛋白30，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

凝血栓蛋白(thrombospondin，THBS)是一种糖蛋白，它是血小板的alpha颗粒的组分，在血小板被激活后释放，在二价阳离子存在时THBS结合于血小板膜，它可以帮助血小板的凝聚。除了在血小板中有作用外，THBS的合成、分泌还与内皮细胞、纤维原细胞、平滑肌细胞等都有关系。(J Cell Biol 1982Oct；95(1)：351-4)

THBS至少包括以下四种功能域：氨基末端的肝磷脂结合功能域；包含CSVTCG序列的类型I重复片段；包含RGDA序列的类型III钙离子结合重复片段；羧基末端的细胞或血小板结合功能域。实验的结果表明，THBS的COOH-末端的细胞结合功能域包含有至少两段序列(GRGDSP和VTCG)，可以调控THBS与细胞或血小板的结合。(J Biol Chem 1992 Aug 15；267(23)：16230-6)

从结构上看，THBS包含有可与肝磷脂、硫苷脂、纤维蛋白原、纤维结合蛋白、纤维蛋白溶解原、类型V胶原质等结合的结构域。

根据原位杂交的结果，编码人THBS1的基因被定位于人染色体15q15，THBS1包含有很多不同的功能域，包括三个重复的亚基(类型I，II，III)。具体的研究结果表明：类型I重复结构由对称的外显子编码；肝磷脂结合功能域由一个单个的外显子编码，具体的结构请参阅相关文献。(Genomics 1990Apr；6(4)：685-91)

THBS的主要功能是导致血小板的凝聚。位于THBS的膜上的糖蛋白IIb-IIIa复合物是作为纤维蛋白原受体起作用的，当其与纤维蛋白原结合时，就发生第一步可逆的凝集，在更强的刺激下，凝血栓蛋白从血小板的alpha颗粒上释放出来，通过其与纤维蛋白原的相互作用，会导致第二步不可逆的血小板凝集。(Annu RevMed 1986；37：179-86)

THBS1是凝血栓蛋白的一个亚家族。体外的实验结果表明，THBS1可以调控细胞的粘合、增殖、移动和分化。在体内，THBS1的功能通过同源基因的重组实验得以研究，结果表明，THBS1的变异会导致血小板的缺乏，但是凝血酶诱导的血小板凝聚反应并未减少。THBS1缺乏的鼠的脑、心脏、肾、脾、胃、肠、动脉、肝等组织并未有明显的变异，只是在缺乏THBS1的肺中发现了异常，会导致肺炎的发生和巨噬细胞数目的减少。(J Clin Invest 1998 Mar 1；101(5)：982-92)

在皮肤损伤的治愈过程中，凝血栓蛋白有着重要的作用，此外，它对眼部无血管组织(晶状体)纤维化的疾病的治疗也有着极其重要的作用。(HistolHistopathol 1999 Oct；14(4)：1309-20)

还有研究表明，THBS1是一种有粘性的糖蛋白，它可以促进人乳癌细胞与人的血管内皮细胞的粘合，而肝磷脂结合功能域和类型I，II重复结构功能域可以调节上述的作用。(J Cell Biochem 1996 Sep 15；62(4)：431-42)

根据氨基酸同源比较的结果，本发明的多肽被推断鉴定为一种新的人凝血栓蛋白30(HTHBS 30)，其同源蛋白是小家鼠的类型1凝血栓蛋白，蛋白号是AB016768。

由于如上所述人凝血栓蛋白30蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人凝血栓蛋白30蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人凝血栓蛋白30蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人凝血栓蛋白30以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人凝血栓蛋白30的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人凝血栓蛋白30的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人凝血栓蛋白30的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人凝血栓蛋白30的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人凝血栓蛋白30的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。