[发明专利]一种新的多肽——钠泵的β亚基10和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--钠泵的β亚基10，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

钠泵(Na+，K+ ATPase)存在于所有动物细胞的质膜中。钠泵通过调节质膜两侧离子浓度(钠离子转出，钾离子转入并且伴随ATP的水解)，进而控制细胞的离子梯度、渗透平衡和膜电位等等。钠泵由两个亚基所构成：异源三聚体组成的α亚基(具有催化功能)和异源二聚体组成的β亚基。

钠泵的β亚基根据物种和所在组织不同，包含302-304个氨基酸不等。β亚基穿过细胞膜一次，其氨基末端的大约35个残基位于细胞质内。由于一级结构的相似性，决定了β亚基相同的二级结构。从氨基末端到第一个糖蛋白结合位点表现为α-螺旋；羧基末端的多肽主要为β-折叠和两段短的螺旋；跨膜部分则包含三个强亲水性的螺旋。

β亚基就目前所知有三个异构体，β1和β3有三个糖基化位点而β2有七个糖基化位点；所有的β异构体都有六个位置保守的Cys残基，这些Cys形成的三个二硫键可以保持多肽三级结构的稳定性。

在所有的β亚基中均发现有这样两个相同的残基序列。第一个位于胞内域中，其顺序为：(Phe,Tyr,Trp)-X(2)-(Phe,Tyr,Trp)-X-(Phe,Tyr,Trp)-(Asp,Asn)-X(6)-(Leu,Ile,Val,Met)-Gly-Arg-Thr-X(3)-Trp。第二个位于胞外域中，包含一个由两个Cys组成的二硫键，其顺序为：(Arg,Lys)-X(2)-Cys-(Arg,Lys,Gln,TRp,Ile)-X(5)-Leu-X(2)-Cys-(Ser,Ala)-Gly。(其中X表示任意氨基酸残基，一种盐水小虾(brine shrimp)其钠泵β亚基不包含第二条序列。)

在钠泵合成及转运到质膜表面的过程中β亚基起了重要的调节作用。胃的质子泵(K+,H+ ATPase)也包含两个亚基，它的β亚基和钠泵的β亚基非常相似。

由于如上所述钠泵的β亚基10蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的钠泵的β亚基10蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新钠泵的β亚基10蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--钠泵的β亚基10以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码钠泵的β亚基10的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码钠泵的β亚基10的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产钠泵的β亚基10的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--钠泵的β亚基10的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--钠泵的β亚基10的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与钠泵的β亚基10异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中145-417位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1070位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制钠泵的β亚基10蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。