[发明专利]一种新的多肽——人CCAAT结合因子9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人CCAAT结合因子9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

真核生物RNA聚合酶Ⅱ启动子包含多种DNA元素及控制转录活性的元素。这些元素对许多不同的Ⅱ型启动子都是普遍存在的。对无亲缘关系的Ⅱ型启动子的比较序列分析显示，有几个共有元素的存在，包括the cap signal,TATAbox,CCAAT box,GC boxes。在高等真核生物的启动子中，CCAAT box普遍存在于转录起始位点的80bp-100bp，通过在不同种属间的比较，发现CCAAT box是高度保守的。在这几个启动子中，CCAAT box和其它启动子特异元素间的空间在不同种属间也是保守的。

CCAAT box是一个在真核生物中绝大多数基因的启动子和增强子中普遍存在的顺式元素。许多DNA结合蛋白都与CCAAT box结合。在这些蛋白质中已知的有一种CCAAT结合因子(CBF)或NF-Y。CBF是由两个不同的DNA必要元素组成的一个异数转录因子(heteromeric transcription factor).

CBF的第一个亚基，在脊椎动物中有CBF-A或NF-YB，在出芽酵母中为HAP3，在裂殖酵母中为php3，这个亚基有116到210个氨基酸残基，含有一段约90个残基的高度保守中心domain。这个domain参与DNA的结合，在此中央部分，我们发展了一个信号模式。

CBF的第二个亚基，在脊椎动物中有CBF-B或NF-YA，在出芽酵母中为HAP2，在裂殖酵母中为php2，这个亚基有265到350个氨基酸残基，含有一段约60个残基的高度保守区域。这个区域被称为“essential core”，它含有两个亚结构域：N端的亚基相关结构域和C端的DNA识别结构域。参与DNA的结合，在此中央部分，我们从亚基相关domain发展了一个信号模式。共有模式C-V-S-E-x-I-S-F-[LIVM]-T-[SG]-E-A-[SC]-[DE]-[KRQ]-C存于所有CBF-A亚基中；共有模式Y-V-N-A-K-Q-Y-x-R-I-L-K-R-R-x-A-R-A-K-L-E此模式存于所有CBF-B亚基中。

CBF与DNA结合的亲合力取决于CCAAT两侧的序列，在启动子中CCAAT序列的每一个核苷的突变都会减少或终止与CBF的结合。CBF能与许多真核基因的近启动子区域结合，这说明了CBF能控制这些启动子的转录。另外，在特定条件下几种细胞系中CBF-B的不同表达将导致依赖CBF的启动子活性的不同。CBF结合位点对单核细胞，巨噬细胞等的启动子的活性也是必需的。转录的激活应归于CBF与DNA的结合的增强。

启动子活性的激活和表达是CBF结合位点介导的。在血清刺激细胞中，CBF对htk启动子活性的最大化是必需的，而且，在静止的细胞中，CBF结合位点与CCAAT转移蛋白(CDP/cut)相互作用，通过干预CBF依赖的转录活性抑制转录。这表明CDP/cut可以作为一个CBF活性的负调节剂。

由于如上所述人CCAAT结合因子9蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人CCAAT结合因子9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人CCAAT结合因子9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人CCAAT结合因子9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人CCAAT结合因子9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人CCAAT结合因子9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人CCAAT结合因子9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人CCAAT结合因子9的抗体。本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人CCAAT结合因子9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人CCAAT结合因子9异常相关的疾病的方法。