[发明专利]鲨鱼软骨中抗肿瘤活性成分的提取工艺

说明书

本发明涉及从鲨鱼软骨中提取抗肿瘤活性成分的工艺。

鲨鱼软骨中含有中性糖、酸性粘多糖、硫酸软骨素、蛋白质及多种酶的成分，鲨鱼软骨的提取物中含有高浓度的抑制新生血管生成的活性成分，具有抗肿瘤生长作用，因而常用于肿瘤的治疗。有关鲨鱼软骨中活性成分的研究有大量的报道，鲨鱼软骨中有效成分的提取也有不少方法，比如海军医学研究所(该所沈先荣、贾福星的鲨鱼软骨制剂抗肿瘤作用的研究，发表在第四次中国海洋湖沼药物学术开发研讨会论文集下册，烟台，1994.4)以鲨鱼软骨为原料，经盐酸抽提，丙酮分级沉淀、超滤、柱层析等步骤制得鲨鱼软骨制剂，经小鼠动物实验，该制剂具有较强的抑制肿瘤生成的活性；再如加拿大莱斯实验特纳公司的专利(E.杜邦，P.布拉泽奥，C.朱尼奥，具有抗血管生成活性和肿瘤消退作用的鲨鱼软骨提取物及其制备方法；中国专利97年CN 1153477)中，将鲨鱼软骨加入中性水中混合、离心，将上清液冻干后得到了鲨鱼软骨提取物，该提取物具有抗血管生成特性和体内肿瘤消退的活性，并且对肿瘤细胞显示直接的抑制作用，这些提取方法多以提取某种或某类成分为目的，生产得率较低。

由于鲨鱼软骨原料价格昂贵，在大生产中需要考虑生产得率，并最大限度地保留其活性成分，本发明的目的在于提供一种新的对鲨鱼软骨成分进行提取的工艺，可有较高的收率。

本发明的技术方案是这样实现的：鲨鱼软骨中抗肿瘤活性成分的提取工艺，它主要包括将鲨鱼软骨粉碎后混合，再匀桨或研磨，然后经搅拌提取、离心分离、浓缩、冻干、粉碎、过筛后保藏，其特征在于：将粉碎后的鲨鱼软骨加入到按重量比的1∶2-1∶15的碱式盐水溶液中，该碱式盐水溶液的重量浓度为0.5-5％，匀桨或研磨是将软骨渣与碱式盐溶液形成的混合物在匀桨器、研磨机或胶体磨中进行充分分散，达到20目以下的细度；离心分离是将搅拌提取后的混合物通过冷冻离心或常温离心将固体和液体分开，浓缩是将离心分离骨渣所得的液体通过超滤或纳滤手段进行浓缩，保留分子量在500道尔顿以上物质，所有操作都在低于60度的温度下进行。

本发明由于将粉碎后的鲨鱼软骨加入到碱式盐中，并采用相应的匀桨或研磨和浓缩手段，对鲨鱼软骨进行了提取，既可保留这些成分的活性，又保障了较高的收率。

下面对本发明作进一步的描述并给出实施例。

本发明主要包括将鲨鱼软骨粉碎后混合，再匀桨或研磨，然后经搅拌提取、离心分离、浓缩、冻干、粉碎、过筛后保藏，其特征在于：将粉碎后的鲨鱼软骨加入到按重量比的1∶2-1∶15的碱式盐水溶液中，该碱式盐的水溶液的重量浓度为0.5-5％，以下的浓度均为重量浓度，也可将骨粉、碱式盐混合后加到水中，使该碱式盐的浓度达到0.5-5％，碱式盐包括钠、钾的碳酸盐，碱式磷酸盐和有机酸盐，在实施例中碱式磷酸盐为磷酸氢二钠和磷酸氢二钾，有机酸盐为乙酸、丙酸及柠檬酸的钠盐和钾盐；匀桨或研磨是将软骨渣与碱式盐溶液形成的混合物在匀桨器、研磨机或胶体磨中进行充分分散，使骨渣的细度小于5μm；搅拌提取一般在搅拌式反应器中进行，需搅拌2-12小时，离心分离是将搅拌提取后的混合物通过冷冻离心或常温离心将固体和液体分开，浓缩是将离心分离骨渣所得的液体通过超滤(分子截留量4000道尔顿)或纳滤(分子量截留量300道尔顿)方法进行浓缩，体积浓缩比为2∶1-10∶1，下面的浓缩比均为体积浓缩比，再采用冷冻真空干燥机对浓缩液进行冷冻干燥，温度为摄氏负50度至负10度，以下均为摄氏度，即可得到鲨鱼软骨的活性提取物，所有操作都在低于60度的温度下进行，据检验采用本发明得到的提取物含有鲨鱼软骨素、酸性粘多糖、中性糖及蛋白质等活性成分，能溶于水，易于吸收，无任何毒副作用，对癌细胞(肝癌、子宫颈癌等)血管内皮细胞的DNA合成及细胞增殖有明显抑制，对实体瘤(肺癌、骨肉瘤等)的抑制率为40-70％，同时由于含有粘多糖，还具有提高机体免疫功能的作用。

实施例1

将20公斤鲨鱼软骨粉碎至20目，加入到200公斤浓度为1％的碳酸钠溶液中进行混合，将混合物用匀桨器匀桨至＜5μm得到料液，再将该料液加到搅拌器中搅拌，温度为室温25度，搅拌时间6小时，然后采用冷冻离心机在4度下，进行固液分离，得到上清液，再用超滤机将该上清液浓缩，浓缩比为1∶0.3，分子截留量为4000道尔顿，再经负40度冷冻真空干燥后，得提取物3.21公斤，产品得率16％。

实施例2