[发明专利]新的人核糖核酸酶pH及其编码序列

说明书

本发明属于生物技术领域和遗传工程领域，具体地说，本发明涉及了一种新的多肽——人核糖核酸酶PH(Novel Human Ribonuclease PH，简称“BioRPH”)，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

RNase PH是唯一已知的磷酸依赖性核糖核酸外切酶，在tRNA前体加工过程中起必要作用，它作用于tRNA前体的3′端。RNase PH在核糖体代谢中起必要的作用，且这一功能不能为细胞内其它任一核糖核酸外切酶所代替[Zhou Z，et al.，J Bacteriol 1997；179：4391-5]。RNase PH包含螺旋-转角-螺旋构成的基序，能与DNA非特异性结合。

RNase PH能以磷酸解的形式降解RNA链，并释放二磷酸核苷酸。它也能催化在RNA的3′端附加核苷的合成反应。此酶能抑制在-CCA序列之后含附加残基的tRNA前体的合成，能作用在这些分子上产生具氨基酸受体活性的成熟tRNA。RNase PH的合成活性与酶浓度的增加并不表现出线性反应特征，这可能是由于蛋白的自身聚集而引起。RNase PH的高度有序多聚体能被凝胶过滤检测到[Kelly KO，et al.，J Biol Cell1992；267：17153-8]。

研究表明，核糖核酸酶PH的过度表达或抑制会引起转录加工的异常，从而影响蛋白质的正常表达，引发免疫紊乱、癌症等疾病。因此，为诊断、预防、治疗相关疾病，研究和开发人核糖核酸酶PH有重要意义。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人核糖核酸酶PH(简称为“BioRPH”)以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该BioRPH多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码BioRPH的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码BioRPH的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产BioRPH的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的BioRPH多肽的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明BioRPH多肽的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断和治疗与BioRPH异常相关的疾病的方法。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的人核糖核酸酶PH(BioRPH)，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽或其氨基酸变异不超过5％的衍生物。

在本发明的第二方面，提供分离的编码这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性：(a)编码上述BioRPH的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中39-746位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1004位的序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

下列附图用于说明本发明的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本

发明范围。

图1是本发明的人核糖核酸酶PH(BioRPH)和Archaeoglobus fulgidus的核糖核酸酶PH(AE001070)的氨基酸序列同源性比较图。相同氨基酸在两个序列间用单字符氨基酸表示，相似氨基酸用“+”表示。

如本发明所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。例如，活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。

如本文所用，“分离的BioRPH蛋白或多肽”是指BioRPH基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化BioRPH。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。BioRPH多肽的纯度能用氨基酸分析确定。