[发明专利]一种新的多肽－丙糖磷酸异构酶9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——丙糖磷酸异构酶9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

葡萄糖的分解代谢是生物体获取能量的主要途径，糖酵解即是生物体分解葡萄糖以获得能量ATP的主要代谢过程。无论是厌氧生物还是需氧生物，几乎每一个生命细胞都能进行糖酵解。糖酵解过程中涉及众多不同的酶的作用，如磷酸果糖激酶、丙糖磷酸异构酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶等，这些酶的表达异常都将影响糖酵解过程的正常进行，从而导致生物体能量代谢途径的异常。这些中间调节物通常与一些糖代谢紊乱症及生物体各种物质代谢紊乱症的发生密切相关。

丙糖磷酸异构(TIM)酶是一重要的糖酵解酶，在生物体内催化甘油醛-3-磷酸与二羟丙酮磷酸间的可逆转变。TIM在许多代谢途径中均起着极为重要的作用，其是生物体代谢反应生成能量所必需的。对原核生物及真核生物中该酶的研究发现，其是有由一些特定的亚单位组成的二聚体，每一亚单位由约250个氨基酸残基组成，其中谷氨酸残基是其催化机制的中心组成成分[Elias Lolis,Tom Alber et al.,1990,Biochemistry,29:6609-6618]。该酶在进化上高度保守。现今所发现的丙糖磷酸异构酶的活性位点的序列片段均高度保守。

在所有已知的丙糖磷酸异构酶活性中心片段中均含有如下所示的一致性序列片段：[AV]-Y-E-P-[LIVM]-W-[SA]-I-G-T-[GK](其中E为活性位点氨基酸残基)；该序列基序是丙糖磷酸异构酶催化糖酵解途径进行的重要作用中心，该基序的突变将直接影响生物体糖酵解过程的异常。该酶的过度表达将导致生物体内能量的无效流失；而其表达水平过低，又将影响生物体内能量的正常供应，从而影响各种相关的代谢途径。因而，该酶在生物体内通过调节糖酵解过程来可逆的维持生物体内的各种能量代谢的平衡。该酶在生物体内的表达通常与生物体内各种糖代谢紊乱症、物质代谢紊乱症等疾病的发生密切相关。

由于如上所述丙糖磷酸异构酶9蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的丙糖磷酸异构酶9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新丙糖磷酸异构酶9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——丙糖磷酸异构酶9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码丙糖磷酸异构酶9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码丙糖磷酸异构酶9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产丙糖磷酸异构酶9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——丙糖磷酸异构酶9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——丙糖磷酸异构酶9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与丙糖磷酸异构酶9异常相关的疾病的方法。本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中451-696位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1160位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制丙糖磷酸异构酶9蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。