[发明专利]一种新的多肽－Kringle蛋白8和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--Kringle蛋白8，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

Kringle是一种特殊的蛋白质二级结构，最初在人的凝血素中发现，后发现以不同拷贝存在于人的血纤维蛋白酶原、组织纤维蛋白酶原激活因子、尿激酶、载脂蛋白A等蛋白中。这些Kringle有相同的起源，在进化过程中为了适应不同的功能，因而产生了各不相同的分化，但在总的结构上保持相似。每个Kringle是结构上独立的单位，以二硫键桥交叉结合形成结构域。

Kringle既可以单拷贝的形式存在又可以多拷贝的形式存在，比如在载脂蛋白A中就有高达38个拷贝，而在凝血因子Ⅻ中仅有一个拷贝，通常多个拷贝的Kringle之间形成一系列小的串联结构。对多种Kringle的二级结构进行分析比较，发现结构域中呈现较多的β-折叠，而α-螺旋结构却很少。在多种蛋白的Kringle序列中，有一段较为保守的氨基酸结构：[Phe-Tyr]-Cys-Arg-Asn-Pro-[Asp-Asn-Arg]。

在各种含有Kringle结构的蛋白中，Kringle的构象并不完全相同，因而在功能特性上也产生了差异，许多功能上的差异是由于某些氨基酸的变更引起的。Kringle区域起着蛋白质之间的结合介质的作用，结合诸如膜、其它蛋白质或磷脂等，并且也有调节蛋白水解活性的功能。

由于如上所述Kringle蛋白8蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的Kringle蛋白8蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新Kringle蛋白8蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--Kringle蛋白8以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码Kringle蛋白8的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码Kringle蛋白8的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产Kringle蛋白8的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--Kringle蛋白8的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--Kringle蛋白8的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与Kringle蛋白8异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中14-244位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-521位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制Kringle蛋白8蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与Kringle蛋白8蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。

本发明也涉及一种药物组合物，它含有本发明多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。

本发明还涉及本发明的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于Kringle蛋白8表达异常所引起疾病的药物的用途。