[发明专利]一种新的多肽－以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

有一类以延胡索酸为底物的裂解酶在蛋氨酸附近有一段同源序列。这段同源序列很可能与其催化活性有关。这些酶包括：

延胡索酸酶(延胡索酸水合酶)。此酶催化延胡索酸到L-苹果酸的可逆的水合反应。这类酶共有两种：Ⅰ类是热不稳定的酶二聚体(例如：大肠杆菌fumC)；Ⅱ类是热稳定的酶三聚体，在原核生物，真核生物中都存在。

天冬氨酸酶。此酶催化天冬氨酸分解为延胡索酸以及氨的可逆反应。

精氨琥珀酸裂解酶催化精氨酸琥珀酸分解为精氨酸和延胡索酸的反应，是精氨酸生物合成的最后一步。

腺苷酸琥珀酸酶(腺苷酸琥珀酸裂解酶)催化嘌呤的从头合成的第8步。此酶还能够催化从腺苷酸琥珀酸合成延胡索酸和AMP。

以上涉及的化合物都是三羧酸循环的重要的中间产物。三羧酸循环是将葡萄糖氧化分解获得能量的重要途径之一，也是细胞的碳流动的主要途径。此循环发生紊乱会使细胞能量循环发生紊乱，并且将导致细胞各种氨基酸的代谢紊乱导致各种代谢病。阿尔兹海墨氏症也与残羧酸循环的紊乱有关。

由于如上所述以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中637-975位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2125位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。

本发明也涉及一种药物组合物，它含有本发明多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。

本发明还涉及本发明的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于以延胡索酸为底物的裂解酶家族蛋白12表达异常所引起疾病的药物的用途。