[发明专利]一种新的多肽－黄素蛋白亚基9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——黄素蛋白亚基9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在细菌代谢的富马酸和琥珀酸相互转换过程中，涉及两种独特的和膜结合的酶化合物。其一是需要厌氧环境的富马酸还原酶，另一种是需要有氧环境的琥珀酸脱氢酶。这两种酶都有两个部分组成，一个膜外部分包括一个结合FAD的黄素蛋白和一个铁硫蛋白，一个疏水部分包括一个膜固定蛋白和(或)一个细胞色素B。真核生物线粒体琥珀酸脱氢酶(即辅酶Q)由二个亚基组成，一个黄素蛋白和一个铁硫蛋白。

黄素蛋白亚基9是一段分子量约60-70KD的多肽，其N端有一个保守序列：R-(ST)-H-(ST)-X(2)-A-X-G-G，H即FAD结合位点，黄素的异咯嗪上的8α-CH₂基通过共价键与组氨酸的N-3相结合。黄素蛋白亚基9还有一些高度保守序列，在N端附近4个疏水性残基形成βαβ结构，紧接着是一段α-螺旋形成的侧链及一段疏水性的β-折叠。这些序列通过非共价键与FAD分子的AMP部分结合。另外，在N端下游约300-400个残基处形成另一个AMP结合域。FAD的结合受氧化还原电势变化的影响。

由于如上所述黄素蛋白亚基9蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的黄素蛋白亚基9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新黄素蛋白亚基9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——黄素蛋白亚基9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码黄素蛋白亚基9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码黄素蛋白亚基9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产黄素蛋白亚基9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——黄素蛋白亚基9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——黄素蛋白亚基9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本发明的另一个目的是提供诊断治疗与黄素蛋白亚基9异常相关的疾病的方法。本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中155-412位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-551位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制黄素蛋白亚基9蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与黄素蛋白亚基9蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。

本发明也涉及一种药物组合物，它含有本发明多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。

本发明还涉及本发明的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于黄素蛋白亚基9表达异常所引起疾病的药物的用途。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。