[发明专利]一种新的多肽——间隙连接蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--间隙连接蛋白9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在组织中，细胞之间能够通过特定的胞间通道分享离子、第二信使和小的代谢产物，称为间隙连接。实现这种功能的连接子由一种完整的膜蛋白的六聚体组成，这种膜蛋白通常称为间隙连接蛋白(Cx)，一个通道包含了分别位于两个细胞上的两组六聚体连接蛋白装配而成。间隙连接蛋白家族是一个相互联系的多基因家族，在一个特定的种内，虽然结构上相似，但还存在着许多差异以及组织特异性。

在结构上，单条连接蛋白由一个较短的细胞质N-末端区域，中间肽段弯曲折叠成四个跨膜区段以及两个胞外、一个胞内的环结构，C-末端也位于细胞质中，并且不同的连接蛋白之间长度有非常大的差异，从20个氨基酸残基(Cx26)至260个氨基酸残基(Cx56)不等，整个构象呈不规则的W状。

间隙连接蛋白家族各个蛋白之间的相似程度约50％-80％，不同之处主要是位于细胞质内的C-末端区域，不管是氨基酸长度还是氨基酸序列都有很大的差异。位于细胞膜外的两个环非常保守，每个环包含了三个Cys残基，通过形成二氧化硫键来实现细胞与细胞之间的连接。两段环结构的保守序列如下：(1)C-[DN]-T-X-Q-P-G-C-X(2)-V-C-Y-D；(2)C-X(3,4)-P-C-X(3)-[LIVM]-[DEN]-C-[FY]-[LIVM]-[SA]-[KR]-P。胞外部位的相似性有助于细胞之间的紧密粘连，而胞内部分的特异性有助于对穿过通道的小分子物质进行必要的选择，避免一些不需要的或有害的物质的侵入。

间隙连接形成的跨膜通道实现了小分子的从一个细胞向邻近细胞的扩散，并且实现最合理的物质分配，各取所需。这种细胞间物质的交流有助于调节细胞的活性，包括细胞生长的调节、细胞分化的调节等。细胞粘连后代谢能力也会发生变化，连接蛋白还能作为某些代谢途径中涉及酶的体细胞突变的抑制剂。细胞膜上酪氨酸激酶受体的激活能抑制间隙连接的胞间交流，比如肝细胞生长因子，其表面含有酪氨酸激酶受体，能够抑制角化细胞的连接。PTA，一种促肿瘤生长的因素，也能对胞间交流起抑制作用。

在人体内，细胞之间物质交流与各种组织器官肿瘤有极为密切的关系，比如乳腺癌、上皮细胞癌、肝细胞癌、人造骨细胞癌等等。Cx43和Cx32在正常肝细胞中大量表达，但在肝细胞癌发生部位，Cx32的表达状况明显弱于其周围非肿瘤区，证明细胞之间的连接受到了影响，使致癌物质的活性明显下降。另外还发现，妇女怀孕期间和分娩时Cx43的表达也会增加。

由于如上所述间隙连接蛋白9蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的间隙连接蛋白9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新间隙连接蛋白9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——间隙连接蛋白9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码间隙连接蛋白9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码间隙连接蛋白9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产间隙连接蛋白9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--间隙连接蛋白9的抗体。本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--间隙连接蛋白9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本发明的另一个目的是提供诊断治疗与间隙连接蛋白9异常相关的疾病的方法。本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中655-903位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-950位的序列。