[发明专利]一种新的多肽——P53肿瘤抗原蛋白13和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——P53肿瘤抗原蛋白13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

P53肿瘤抗原蛋白在转化细胞中大量表达，在一些增殖的非转化细胞中也发现有该蛋白的表达，但其表达量明显低于前者。研究发现，在一些肿瘤及癌症细胞中存在大量该蛋白的突变体。P53被认为是一种肿瘤抑制因子，但并不是对所有的肿瘤。对一些肿瘤P53不具有抑制作用，甚至还具有相反的副作用，如：卵巢肿瘤。在生物体内，P53主要涉及各种细胞周期调控过程，其可能作为一种反式激活蛋白，通过调节细胞周期所需的一系列基因的表达来反向调节细胞的分裂。

细胞周期循环涉及一系列的过程，不同的阶段由各种不同的调节因子通过正调控或负调控来共同完成。P53蛋白就是其中的一种非常常见的负调节因子。P53蛋白的突变，或其与DNA肿瘤病毒原癌基因产物的相互作用将导致癌症的发生[Leine A.J.,Momand J.et al.,1991,Nature,351:453-456]。由上可知，P53在生物体内有着十分重要的作用，其通过调控细胞周期的各种中间调节物的表达来调节细胞的分裂与分化。该蛋白的表达异常通常与生物体内的各种发育紊乱症、各种肿瘤及癌症等疾病的发生相关。

P53蛋白是一种磷蛋白，约由390个氨基酸残基组成。该蛋白通常可分成四个结构域：一个由75-80个氨基酸残基组成的高度变换的酸性区域；一个富含脯氨酸的疏水性结构域；一个蛋白中心区域和一个高度保守的C末端区域。在脊椎动物中，P53蛋白的氨基酸序列是高度保守的。    

研究发现，在P53蛋白的中心区域含有如下所示的一致性序列片段：M-C-N-S-S-C-M-G-G-M-M-N-R-R；所有不同来源的P53蛋白均含有这一保守的序列片段。该序列片段在生物体内调节蛋白与SV40的T抗原结合，以产生对应的抗体，抑制肿瘤细胞的增殖。由此可知，P53蛋白在生物体内主要作为一种细胞循环的负调节物，调节生物体内的各细胞的正常循环。同时，其又是一种肿瘤抑制因子。其表达异常与生物体内各种发育紊乱症、一些肿瘤及癌症的发生密切相关。特别的是其在卵巢癌中无抑制活性，相反其将促进该疾病的发生。

由于如上所述P53肿瘤抗原蛋白13蛋白在机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的P53肿瘤抗原蛋白13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新P53肿瘤抗原蛋白13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——P53肿瘤抗原蛋白13以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码P53肿瘤抗原蛋白13的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码P53肿瘤抗原蛋白13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产P53肿瘤抗原蛋白13的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——P53肿瘤抗原蛋白13的抗体。本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——P53肿瘤抗原蛋白13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本发明的另一个目的是提供诊断治疗与P53肿瘤抗原蛋白13异常相关的疾病的方法。本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中1716-2072位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2434位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。