[发明专利]对由突变的p53导致的DNA调制的抑制

说明书

本发明涉及对由突变的p53导致的DNA调制的抑制方法，本发明还涉及用于鉴别适用于这种抑制的物质的系统。

细胞中存在称为p53的蛋白质，这一蛋白是肿瘤抑制蛋白，其在DNA损伤时活化，然后其与靶基因的启动子结合并激活该基因的转录。结果是，细胞的生长停顿和随后DNA损伤的修复以及细胞死亡得以实现。

如以前所证实的，p53在许多肿瘤中发生突变。突变形式的p53通常没有肿瘤抑制蛋白活性，甚至其以具有致癌性质的蛋白质存在。已进行了各种实验抑制突变的p53(以下称为mut p53)的致癌性质。但是这些实验没有得到满意的结果。

因此，本发明的目的在于提供一种产物，通过其可以研究mutp53，并任选地抑制其致癌性质。

根据本发明，这一目的由权利要求书中限定的主题实现。

因此，本发明的主题涉及抑制由mut p53导致的DNA调制的方法，包括抑制mut p53与具有链分离势的DNA的结合。

本发明基于本申请人的发现，即mut p53而非野生型p53可以导致具有链分离势的DNA的调制。申请人发现，这种DNA是广泛分布的并通常存在于MAR DNA。MAR(“基质附着区”)DNA是指染色质的高级调节元件，通过其将染色质分成拓扑学独立的“环”，从而能对基因表达和DNA复制进行独立的空间和时序调节。申请人还发现具有链分离势的DNA经常包括序列AATATATTT或其变体。除了所述序列外，该DNA还经常包括富含AT的其它区域。另外，本申请人认识到DNA的调制可以是不同的，例如，mut p53与该DNA的牢固的复合物，或者其链分离。申请人发现当所指示的序列和任选地相邻序列全部由AT组成时，所述的调制通常是链分离。另一方面，如果在序列中不存在或仅存在较弱的全AT性质，则调制通常是牢固的复合物。另外，申请人发现，当mut p53与具有链分离势的DNA的结合被抑制时，由mut p53导致的DNA调制可被抑制。

根据本发明，这些观察被用于抑制由mut p53导致的DNA调制的方法中。这种方法包括抑制mut p53与具有链分离势的DNA的结合。

术语“mut p53”包括能与具有链分离势的DNA结合的任何p53或其一部分。具体地，p53可以是具有突变的核心区和/或突变的C-末端的p53。这种p53突变体的例子是Pro273 p53和MethA p53。mutp53也可以与另一种蛋白质共同存在于一种融合蛋白中。

术语“具有链分离势的DNA’包括可由mut p53调制的任何DNA。调制可以是不同的，例如mut p53和具有链分离势的DNA的牢固的复合物，或其链分离。特别是，具有链分离势的DNA可以是包括一或几个拷贝的序列AATATATTT或其变异序列的DNA。另外，该DNA也可进一步包括富含AT的区域。具有链分离势的DNA优选在MAR DNA中发现。

术语“结合”包括mut p53与具有链分离势的DNA结合的任何类型和方式。特别是结合可以是mut p53直接与DNA结合的方式。结合也可以是mut p53间接即通过其它因子如蛋白质与DNA结合。

术语“抑制”包括可以抑制mut p53与具有链分离势的DNA结合的任何类型和方式。抑制类型取决于mut p53是直接还是间接与DNA结合。在间接结合的情况下，即通过其它因子如蛋白质而结合，可通过抑制所述的其它因子的物质发生抑制。还可以加入抑制mut p53的物质。在mut p53直接结合DNA的情况下，采用抑制mut p53的物质似乎是实用的。这种物质可以是例如抑制p53的突变核心结构域和/或p53的突变的C-末端的物质。这种物质的例子是抗体PAb 240和PAb 421。

根据本发明，还提供了鉴别适用于抑制由mut p53导致的DNA调制的物质的系统。这种系统包括mut p53，具有链分离势的DNA以及任选地一种物质，该物质对mut p53与具有链分离势的DNA的结合的抑制效应被测试。对于该系统的各个单独组分，上述解释也相应地适用。另外，对DNA的调制及其抑制可用常规方法确定。例如，可以通过EMSA(“电泳迁移率变动分析”)测试确定DNA链分离和复合物形成以及其抑制。为此，常规地，将mut p53与具有链分离势的标记的双链DNA保温，并电泳分离该混合物，从而分别可见单链DNA的形成和其复合物的形成，以及其抑制。