[发明专利]新型微生物及酰胺化合物的制造方法

说明书

本发明涉及一种用于由腈得到酰胺的有用的微生物、及利用该微生物的酰胺化合物的制造方法。

酰胺及其衍生物是一种用于各个领域的有用的化合物，例如，加水分解2-羟基-4-甲硫基丁酰胺而得到的2-羟基-4丁酸用作补充含硫氨基酸类不足的饲料添加剂在家畜、特别是家畜的饲养方面已被使用。

近年来，提出了利用微生物或由微生物中提取的酶的作用、由腈生产酰胺的方法。作为微生物有以下几类：例如，属于杆菌属、芽孢杆菌属、微球菌属、短杆菌属的微生物(特公昭62-21519号公报)；属于棒状杆菌(corgnebacterium)属、诺卡菌(Nocardia)属的微生物(特公昭56-17918号公报)；属于假单胞菌(Pseudomonas)属的微生物(特公昭59-37951号公报)；属于红球菌属(Rhodococcus)、节细菌属(Arthrobacter)、微杆菌属(Microbacterium)的微生物(特开昭61-162193号公报)；属于镰孢菌属(Fusarium)的微生物(特开昭64-86889号公报)；属于不动杆菌属(Acinetobacter)的微生物(特开平2-154692号公报)等。

另外，众所周知，由腈生成酰胺的方法有如下几种：利用黄色杆菌属(Xanthobacter)的方法(特开平2-154692号公报)；利用克雷白杆菌属(Klebsiella)的方法(微生物文集，(Arch．Microbiology，)Vol．156p．231-238(1991))；使用链霉菌属(Streptomyces)、沙雷菌属(Serratia)、欧文菌属(Erwinia)、冢村氏菌属(Tukamurella)菌属、戈登菌属(Gordona)、摩根菌属(Morganella)、变形杆菌属(ProTeas)、肠菌属、微子囊菌属、Camdida菌属、泛菌属(Pantoea)的方法(特开平5-15384号公报)；使用柠檬酸菌属(Citrobacter)的方法(特开平5-30983号公报)；使用根瘤菌属的方法(特开平5-236977号公报)；使用土壤杆菌属的方法(特开平6-14786号公报)等。但是，这些方法生产性都差，高效地工业化生产酰胺是困难的。

在特开平4-40899号公报中公开利用胭脂红分枝杆菌属、棒状杆菌属、假单胞菌属、节细菌属、产碱菌属(Alcaligenes)的微生物、由2-羟基-4-甲硫基丁腈制造2-羟基-4-甲硫丁酰胺的方法。在该文献的实施例中记载了胭脂红分枝杆菌ATCC 33278经40小时的反应使400mM的2-羟基-4-甲硫基丁腈生成最大253mM(浓度37．7g／L、收率63％)的2-羟基-4-甲硫丁酰胺。但是，该方法酰胺生产率速度极低为1g／L．hr以下，不能提高生产率及经济效率。

另外，在WO 98／3287中记载了红球菌属菌株(strain)52及56wt由2-羟基-4-甲硫丁腈生产2-羟基-4-甲硫丁酰胺，也记载了详细的生产方法。但是，该方法在反应开始后一小时以内，菌体的比活性极低，为每1g的干燥菌体为100μmol／min．g-drycell，也不能充分改善生产效率。

另外，一般地微生物的水合活性及对酰胺的转换效率随腈的结构复杂化而变小。因此使结构复杂的腈高效率、快速地生成酰胺是困难的。

所以，本发明的目的在于提供一种用于高效、高生产速度地由腈制造对应的酰胺的有用的新型微生物、及其利用该微生物的酰胺化合物的制造方法。

本发明的另一目的在于提供一种即使腈的结构复杂也能高生产速度地生成酰胺的新型微生物、及其利用该微生物的酰胺化合物的制造方法。

本发明者为了实现所述目的进行了深入地研究，结果发现了具有高生产性地由腈生成酰胺能力的新型的微生物，完成了本发明。

也就是，本发明的微生物为示于序列表的序列号1或者序列号2所示的含有16s rRNA基因的碱基序的新型的微生物。该微生物通常具有将腈转变为酰胺的能力。所述的微生物也可以是属于红球菌属的微生物菌株例如红球菌属sp．Cr4株(FERM BP-6596号(寄存日：1998年12月8日))、红球菌属sp．Am8株(FERM BP-6595号(寄存日1998年12月8日))等。而且，在本发明中也含有使所述微生物或其处理物作用于腈转变为酰胺的酰胺化合物的制造方法。所述腈也可以是2-羟基-4-甲硫丁腈等的羟腈等。

附图的简要说明

图1为显示基于属于红球菌属的本发明的新型的微生物和基于16SrRNA基因碱基序列的类似物的系统树的图。