[发明专利]无蛋白制剂

说明书

发明领域

本发明涉及含有粒细胞集落刺激因子的制剂，并且特别涉及通过防止因在容器壁上吸附、聚集、聚合、氧化等所致的活性组分损失和失活来稳定化的含粒细胞集落刺激因子制剂。

现有技术

粒细胞集落刺激因子(此后也称作“G-CSF”)是分子量约为20，000并作用于嗜神经(neurophil)前体细胞促进其增殖和分化至成熟的糖蛋白。

通过培养获自口腔基底癌患者肿瘤细胞的细胞系，我们提纯出高纯度的人G-CSF，由此成功克隆了人G-CSF基因，而且目前可以通过遗传工程在动物细胞中大量生产重组人G-GSF。我们还成功地将这种纯化G-CSF转化为制剂产品，在市场上它作为抗感染剂供应(日本特许公告号2116515)。

G-CSF以极小的量应用，即含有0．1-1000μg(优选5-500μg)G-CSF的制剂每周向每个成年人给药1至7次。然而，这种G-CSF被吸附在安瓿、注射器等的侧壁上。G-CSF对于外部因素如温度、湿度、氧、紫外线等不稳定且敏感以致发生包括聚集、聚合或氧化在内的物理或化学变化，导致活性严重损失。

因此，已提出多种制剂设计以为市场提供稳定的G-CSF制剂。例如，已推荐一种含有选自醋酸、乳酸、柠檬酸、马来酸、磷酸及其盐或精氨酸及其盐的缓冲剂的制剂(JPA号505610／96)。也有建议含有1-10，000重量份表面活性剂／重量份G-CSF的G-CSF制剂(JPA号146826／88)。后一文献描述了表面活性剂的水平，特别是其下限极其严格以防止G-CSF的损失并且在含G-CSF液体制剂中实现稳定化作用。

本发明的一个目的是提供一种G-CSF制剂，该制剂能够减小制备方法的复杂性并且该制剂对于长时间储存更加稳定。

发明概述

作为达到上述目进行的缜密研究的成果，我们发现即使当制剂只含有极少量表面活性剂作为稳定剂时也可以获得稳定的G-CSF制剂，基于该发现我们完成了本发明。

因此，本发明提供一种稳定的含有粒细胞集落刺激因子和以每1重量份粒细胞集落刺激因子计0．0001-1重量份的至少一种药学上可接受表面活性剂并且pH等于或小于7的含粒细胞集落刺激因子制剂。

在此所用的“稳定化”是指在25℃下保存6个月后剩余的G-CSF为95％或更多，或在40℃下保存2周后剩余的G-CSF等于或多于75％

附图简述

图1．是表示在40℃下2周的加速试验中pH和剩余G-CSF的百分比之间关系的曲线图。

图2是表示在40℃下2周的加速试验中pH和脱唾液酸化(desialylated)G-CSF的产率之间关系的曲线图。

图3是表示在包装后经过24小时以每1重量份G-CSF计的吐温20重量份和吸附抑制率之间关系的曲线图。

本发明的最优选实施方案

任何高纯人G-CSF均可以用于本发明的液体制剂。具体说，G-CSF可以衍生自天然原料或得自于遗传重组，只要该G-CSF具有和哺乳动物的G-CSF，尤其是人G-CSF基本上相同的生物活性。遗传重组G-CSF可以具有和天然G-CSF相同的氨基酸序列或可以在该氨基酸序列中含有缺失、取代或添加的一个或多个氨基酸，只要该遗传重组G-CSF具有所述的生物活性。本发明中的G-CSF可以通过任何方法制备，例如它们可以通过多种技术由人肿瘤细胞系的培养物提取和纯化，或可以通过在大肠杆菌、酵母、中国仓鼠卵巢(CHO)、C127等中的遗传工程来制备且随后通过多种技术提取和纯化。首选在CHO细胞中通过遗传工程制备的G-CSF。