[发明专利]纤溶酶原相关基因B多肽

说明书

发明领域

本发明涉及细胞生物学，血管发生和肿瘤学。联邦资助研究的声明

本发明是在国立卫生研究院颁发的AM16265号政府资助下完成的，美国政府在本发明中具有一定的权利。

发明背景

由肝脏分泌的一种丝氨酸蛋白酶前体纤溶酶原在溶解血块中起一定作用。有活性的双链蛋白酶纤溶酶通过组织型或尿激酶型纤溶酶原激活物切割特异的Arg-Val肽键并自身催化除去N-末端活化前(preactivation)肽而从纤溶酶原产生。纤溶酶攻击血块的主要组分血纤蛋白，从而促进血块溶解。除了其已熟知的溶栓能力外，纤溶酶与其它蛋白酶一起在发育中的组织重建、骨关节炎中的软骨破坏、转移肿瘤细胞对基膜的侵袭中起介体作用。

纤溶酶原相关基因B多肽(PRG-B多肽；也称为plasmilar或纤溶酶原相关蛋白[PRP])已由Weissbach，美国专利5,545,717；Weissbach等，生物化学生物物理研究通讯186:1108(1992)；Ichinose等，生物化学31:3113-3118(1992)描述。信号肽裂解后，成熟PRG-B多肽长度为77个氨基酸，并与纤溶酶原的N-末端活化前肽高度同源。

发明概述

已发现PRG-B多肽在体外禽类模型中抑制血管发生，并在体内哺乳动物模型中也抑制瘤生长。

因此，本发明的特征在于提供一种在鸟类或哺乳动物例如人中抑制血管发生的方法。所述方法涉及鉴别具有不希望的血管发生或处于不希望的血管发生风险中的鸟类或哺乳动物，给予所述动物足以抑制所述血管发生量的PRG-B多肽。涉及不希望的血管发生的状态包括非癌性生长、关节炎和糖尿病性视网膜病。

本发明还提供了用于降低或预防瘤生长如肺癌、乳腺癌或前列腺癌的方法。所述方法涉及鉴别具有瘤生长或处于瘤生长风险中的动物，给予所述动物足以抑制或防止瘤生长量的PRG-B多肽。

本发明还包括(1)用于治疗个体中与不希望的血管发生或瘤生长相关的状态的药物组合物，该组合物包括PRG-B多肽；(2)PRG-B多肽在制备该药物组合物中的应用；以及(3)编码PRG-B多肽的表达载体在制备该药物组合物中的应用。

用于本发明方法中的PRG-B多肽可以是全长成熟plasmilar，其氨基酸序列由Weissbach等，生物化学生物物理研究通讯186:1108(1992)公开(GenBank登录号M93143)。或者，PRG-B多肽可以是plasmilar的功能等价物，即基于plasmilar的肽模拟物，或者这样的一种多肽，其：(1)展示抗血管发生或抗癌活性，并且(2)包括与全长、成熟plasmilar的氨基酸序列共享至少70％相同性的氨基酸序列。优选地，序列相同性为至少80％，更优选地至少90％。

用于本发明方法中的PRG-B多肽的一个具体例子由下述氨基酸序列组成：

MRGSHHHHHH TDPHASSVPR VDPLDDYVNT

QGPSLFSVTK KQLGAGSREE CAAKCEEDKE

FTCRAFQYHS KEQQCVIMAE NRKSSIIIRM RDAVLFEK

(SEQ ID NO:4)

在这一特定序列(SEQ ID NO:4)中，全长成熟plasmilar的氨基末端谷氨酸残基(E)(位置22)被天冬氨酸残基(D)置换。在这一序列(SEQ ID NO:4)中，六个连续的组氨酸残基(位置5-10)作为用于纯化重组多肽(通过其与镍-NTA琼脂糖相互作用)的“聚组氨酸标记”。多肽的氨基末端甲硫氨酸和全长成熟plasmilar的氨基末端之间的其余氨基酸残基是用于产生重组PRG-B多肽的DNA克隆程序的人为假象。