[发明专利]制造鼠和人内源性血管生成抑制因子的方法

说明书

优先权

根据美国法典35条第119节，本申请要求以1998年2月23日提交的，申请号为60/075,587的专利申请为优先权。

                     发明领域

本发明公开了制造鼠和人内源性血管生成抑制因子(endostatin)的方法。本发明也公开了从细菌内表达的包涵体中和编码全长和截断形式内源性血管生成抑制因子的核酸中再折叠和纯化内源性血管生成抑制因子的方法。

                     发明背景血管生成

血管生成，即新血管的生长，在癌生长和转移中起重要作用。在人类，肿瘤中血管床的程度与多种癌症病人的预后相关(Folkman,J.,Seminars in Medicine of the Beth Israel Hospital,Boston 333(26)：1757-1763,1995；Gasparini,G.,European Journal of Cancer 32A(14)：2485-2493,1996；Pluda,J,M.,Seminars in Oncology 24(2)：203-218,1997；Norrby,K.,APMIS 105：417-437,1997)。在正常成人，血管生成被限制在良好控制状态，如在伤口愈合和女性生殖系统(Battegay,E.J.,J Mol Med73：-333-346,1995；Dvorak,H.F,New Engl J Med,315：1650-1659,1986)。

动物研究提示，肿瘤可以休眠状态存在，此时肿瘤生长被高速增殖和高速凋亡之间的平衡限制(Holmgren,L.等.,Nat.Med.(N.Y.)1(2)：149-153,1995；Hanahan，D.等.,Cell 86(3)：353-364,1996)。血管生成表现型的转变使肿瘤细胞脱离休眠而快速生长，估计是肿瘤细胞凋亡速度下降的结果(Bouk,Cancer Cells,2(6)：179-185,1990；Dameron等,Cold Spring Harb Symp Quant Biol,59：483-489,1994)。控制血管生成被认为是促进新血管形成的因子和抑制新血管床形成的抗血管生成因子之间的平衡(Bouck,N.等.,Advances in Cancer Research 69：135-173,1996；O′Reilly等.,Cell 79(2)：315-328,1994)。

多种血管生成前因子以被确定，包括碱性和酸性成纤维细胞生长因子(bFGF和aFGF)和血管通透性因子/血管内皮生长因子(VPF/VEGF)(Potgens,A.J.G.等.,Biol.Chem.Hoppe-Seyler 376：57-70,1995；Ferrara,N.,European Journal of Cancer 32A(14)：2413-2442,1996；Bikfalvi,A.等.,Endocdne Reviews 18：26-45,1997)。数种内源性抗血管生成因子也被确定，包括血管生成抑素(angiostatin)(O′Reilly等.,Cell79(2)：315-328,1994)、内源性血管生成抑制因子(O′Reilly等.,Cell88(2)：277-285,1997)、干扰素α(Ezekowitz等,N.Engl.J.Med.,5月28日,326(22)1456-1463,1992)、凝血栓蛋白(Good等,Proc Natl Acad SciUSA 87(17)：6624-6628,1990；Tolsma等.,J Cell Biol 122(2)：497-511,1993)，和血小板因子4(PF4)(Maione等,Science 247(4938)：77-79,1990)。