[发明专利]在人体内具有较低过敏原性反应的突变体蛋白质以及构建、鉴定和生产这些蛋白质的方法

权利要求书

1．一种蛋白酶变异体，包括在相应于解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶的K170D、Y171Q和/或S173D的前体蛋白酶的一个或多个位置进行取代。

2．如权利要求1的蛋白酶变异体，还包括在与选自N76D、S103A、V104I、G159D、V68A、T213R、A232V、Q236H、Q245R和T260A的那些等价的前体蛋白酶中的一个或多个位置的取代。

3．如权利要求2的蛋白酶变异体，来自杆菌属枯草杆菌蛋白酶。

4．如权利要求3的蛋白酶变异体，来自迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶或地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶。

5．编码权利要求1的蛋白酶变异体的DNA。

6．编码权利要求5的DNA的表达载体。

7．用权利要求6的表达载体转化的宿主细胞。

8．包括权利要求1的蛋白酶变异体的清洗组合物。

9．包括权利要求1的蛋白酶变异体的动物饲料。

10．一种处理织物的组合物，包括权利要求1的蛋白酶变异体。

11．如权利要求1的蛋白酶变异体，包括选自相应于解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶的以下位置的组合取代：

K170D/Y171Q/S173D；

N76D/S103A/V104I/G159D/K170D/Y171Q/S173D；

V68A/N76D/S103A/V104I/G159D/K170D/171Q/S173D/Q236H；

V68A/N76D/S103A/V104I/G159D/K170D/171Q/S173D/Q236H/Q245R；

V68A/N76D/S103A/V104I/G159D/K170D/171Q/S173D/A232V/Q236H/Q245R；和

V68A/N76D/S103A/V104I/G159D/K170D/171Q/S173D/T213R/A232V/Q236H/Q245R/T260A。

12．测定人体内T-细胞表位的方法，包括步骤：

(a)从单一血源获得树突状细胞溶液和原初CD4+和/或CD8+T-细胞溶液；

(b)在所述树突状细胞溶液中启动分化；

(c)将所述经过分化的树突状细胞溶液和所述原初CD4+和/或CD8+T-细胞溶液与感兴趣的肽混合；

(d)测定所述步骤(c)中抗体的生产。

13．一种降低蛋白质的过敏原性的方法，包括步骤：

(a)在所述蛋白质中鉴定T-细胞表位；

(b)修饰所述蛋白质以中和所述T-细胞表位。

14．如权利要求13的方法，其中所述表位是通过以下修饰的：

(a)将该表位的氨基酸序列用来自感兴趣蛋白质的人同系物的类似序列替换；

(b)将该表位的氨基酸序列用来自感兴趣蛋白质的非人同系物的类似序列替换，这样类似序列产生比感兴趣的蛋白质较少的过敏原反应；或者

(c)将该表位的氨基酸序列用大致模仿该表位的主要三级结构特征的序列替换，但是这样它产生比感兴趣的蛋白质较少的过敏原反应。

15．由权利要求14的方法制备的具有降低的过敏原性的蛋白质。

16．具有降低的过敏原性的蛋白质，其中所述蛋白质包括通过权利要求13提供的试验经鉴定为T-细胞表位内的氨基酸残基的取代或缺失的修饰。