[发明专利]微生物制备来自芳族代谢/Ⅲ的物质

权利要求书

1．用于微生物制备来自芳族代谢物质的方法，其中在生产这些物质的微生物中由于增加氧化葡萄糖的酶的活性而转化含葡萄糖底物。

2．按照权利要求1的方法，其特征在于，将葡糖脱氢酶活性引入到所述微生物中和/或在所述微生物中增加葡糖脱氢酶的活性。

3．按照权利要求2的方法，其特征在于，将巨大芽孢杆菌葡糖脱氢酶活性引入到所述微生物中和/或在所述微生物中增加巨大芽孢杆菌葡糖脱氢酶活性。

4．按照权利要求2或3的方法，其特征在于，将巨大芽孢杆菌葡糖脱氢酶Ⅳ活性引入到所述微生物中和/或在所述微生物中增加巨大芽孢杆菌葡糖脱氢酶Ⅳ活性。

5．按照权利要求1-4之一的方法，其特征在于，额外增加使葡萄糖磷酸化的酶活性。

6．按照权利要求5的方法，其特征在于，增加葡糖酸激酶活性。

7．按照权利要求5或6的方法，其特征在于，增加大肠杆菌葡糖酸激酶活性。

8．按照权利要求2-7之一的方法，其特征在于，额外增加葡糖酸内酯酶活性，特别是增加运动发酵单胞菌葡糖酸内酯酶活性。

9．按照权利要求1-8之一的方法，其特征在于，额外增加PEP不依赖性糖摄取的转运蛋白的活性。

10．按照权利要求9的方法，其特征在于，所述转运蛋白是易化蛋白。

11．按照权利要求9或10的方法，其特征在于，所述易化蛋白是运动发酵单胞菌葡萄糖易化蛋白(Glf)。

12．按照权利要求2-11之一的方法，其特征在于，

a)通过引入所述基因

b)和/或通过增加所述基因拷贝数

c)和/或通过增加基因表达

d)和/或通过增加所述酶的内源活性

e)和/或通过改变所述酶的结构

f)和/或通过使用去调节的酶

g)和/或通过引入编码去调节的酶的基因

增加氧化葡萄糖的酶活性或增加氧化葡萄糖的酶，并另外增加使葡萄糖磷酸化的酶、葡糖酸内酯酶和PEP不依赖性糖摄取的转运蛋白的活性中的至少一种活性。

13．按照权利要求12的方法，其特征在于，通过将一种或多种基因整合到一种或几种基因结构中实现所述活性的增加，而所述一种或多种基因作为单拷贝或以增加的拷贝数引入到所述基因结构中。

14．按照权利要求9-13之一的方法，其特征在于，如果存在PEP依赖性糖摄取系统，则另外降低或消除其活性。

15．按照权利要求1-14之一的方法，其特征在于，使用另外参与所述物质合成的一种或多种酶去调节和/或显示活性增加的微生物。

16．按照权利要求1-15的方法，其特征在于，制备的所述物质是芳族氨基酸。

17．按照权利要求16的方法，其特征在于，所述芳族氨基酸是L-苯丙氨酸。

18．按照权利要求1-17之一的方法，其特征在于，使用的微生物属于埃希氏菌属、沙雷氏菌属、芽胞杆菌属、棒状杆菌属或短杆菌属。

19．按照权利要求18的方法，其特征在于，所述微生物是大肠杆菌。

20．基因结构，以重组形式包括或者编码氧化葡萄糖的酶的基因和编码使葡萄糖磷酸化的酶的基因；或者编码氧化葡萄糖的酶的基因和编码PEP不依赖性糖摄取的转运蛋白的基因；或者编码氧化葡萄糖的酶的基因和以下三种基因中的至少两种基因，即编码使葡萄糖磷酸化的酶的基因、编码葡糖酸内酯酶的基因或编码PEP不依赖性糖摄取的转运蛋白的基因。

21．按照权利要求20的基因结构，其特征在于，所述氧化葡萄糖的酶的基因编码葡糖脱氢酶，而所述使葡萄糖磷酸化的酶的基因编码葡糖酸激酶。

22．按照权利要求20或21的基因结构，其特征在于，所述葡糖脱氢酶的基因得自巨大芽孢杆菌，所述葡糖酸激酶的基因得自大肠杆菌，而所述葡糖酸内酯酶和所述转运蛋白的基因得自运动发酵单胞菌。

23．转化细胞，带有可复制形式的按照权利要求20-22的一种基因结构。