[发明专利]血红蛋白－多糖缀合物

权利要求书

1．一种适用作氧转运蛋白的多糖-血红蛋白缀合物，它包含以共价键连接的血红蛋白，即，通过该血红蛋白上的氨基与多糖上由其氧化糖开环而形成的醛基残基之间的仲胺键而连接，所述仲胺键是这样生成的：第一步，通过所述氨基和所述醛基的反应而形成席夫碱键，接着在第二步，通过还原而实现稳定化，该缀合物不含可检测的残余未结合血红蛋白而且不含可检测残余量的、分子量大于约500kDa的组分。

2．权利要求1的缀合物，其中，所述多糖是羟乙基淀粉或葡聚糖。

3．权利要求2的缀合物，其中，所述血红蛋白是人血红蛋白。

4．权利要求3的缀合物，其中，所述血红蛋白是去氧血红蛋白。

5．权利要求3的缀合物，其中，所述血红蛋白被分子内交联了。

6．权利要求3的缀合物，其中，所述多糖是分子量为约70～约1000kDa的羟乙基淀粉。

7．权利要求6的缀合物，其中，所述羟乙基淀粉具有约0.5～0.7的取代比。

8．权利要求6的缀合物，它在37℃下具有4～50的P50。

9．一种制备基于血红蛋白的氧载体的方法，该方法包括：将携带醛基的氧化开环的多糖与血红蛋白反应而生成其缀合物，将该缀合物保持在预定pH的水溶液的受控制条件下而引起该缀合物受控制的分子量减小和分子量再分布，通过将多糖和血红蛋白之间的席夫碱键还原成稳定的仲胺键而稳定该缀合物，然后回收这样生成的多糖-血红蛋白缀合物的溶液，它不含可检测的未结合血红蛋白残余物而且不含可检测的分子量大于约500～600kDa的产物残余物。

10．权利要求9的方法，其中，所述多糖是葡聚糖或羟乙基淀粉(HES)。

11．权利要求10的方法，其中，所述缀合物被保持在约7.2～10的pH条件、约15～30℃的温度的水溶液中而引起分子量减小和分子量再分布。

12．权利要求11的方法，其中，分子量减小和分子量再分布是通过将醛-胺键还原成仲胺键使所述缀合物被稳定而终止在预定程度的。

13．权利要求12的方法，它包括一步还原，从而引起所述稳定化和基本上同时还原残余醛基。

14．权利要求12的方法，它包括两步还原，第一步引起所述稳定化，第二步还原醛基。

15．权利要求13的方法，其中，所述还原是用基于硼的还原剂进行的。

16．权利要求15的方法，其中，所述还原剂是硼烷二甲胺。