[发明专利]佐剂组合物及其使用方法

说明书

疫苗包括抗原或混合抗原，当将其给予温血动物时可以防止、改善或治疗疾病。传染病的疫苗原来包括整个的减弱的或杀死的微生物。然而很快发现，微生物或细胞中只有少量的蛋白质或蛋白质片段刺激保护的免疫反应，事实上，整个细胞外来物质的包含会阻碍免疫反应。因此，疫苗的开发集中于找出会导出保护性免疫反应的具体的蛋白质、蛋白质片段和编码该抗原决定部位的DNA片段。但是，随着抗原鉴定越来越精确，疫苗的效率下降。鉴定出的抗原常是不能由抗原处理细胞识别的小分子。因此需要将这些抗原与能增强该抗原的抗原性以及给予卓越的免疫反应的物质结合起来。这些物质就是佐剂。

佐剂的作用有几种方法。某些帮助将抗原表给予抗原处理细胞(APC)。水包油乳液、油包水乳液、微脂粒和微玻璃细珠都帮助将抗原给予APC。小的抗原或半抗原常连接到更大的致免疫的蛋白质或多糖以促进由APC识别。某些佐剂具有将抗原就地固定直到身体有机会实现免疫反应的储存效果。其它的佐剂刺激免疫系统一般是增大实现抗原上的特异反应。

减弱的脂质A衍生物(ALD)单磷酰基脂质A(MLA)和3-脱酰的单磷酰基脂质A(3D-MLA)是用于传染病的预防性疫苗和治疗恶性肿瘤和慢性感染的治疗疫苗的有效的免疫的佐剂。MLA和3D-MLA是细菌内毒素脂多糖(LPS)的改性形式，是众所周知的，并分别在美国专利4,436,727和4,912094中讨论过。MLA和3D-MLA既能诱发服用具有抗原的该化合物的患者体液的抗体反应也诱发细胞-媒介的免疫反应。

有效的疫苗给予温血动物以抗原，使得动物能实现对这些抗原的保护的免疫反应。为实现这种作用，疫苗常需要包括佐剂，这些佐剂既刺激体液的和细胞的免疫反应并且是安全和无毒的，还会小、增进任何疫苗的效果。

本发明是新佐剂组合物。这种佐剂是包括有新陈代谢的油、表面活性剂、抗氧化剂和使该乳液等渗的成分的稳定的水包油乳液(SE)。这种稳定的乳液的粒径是不到130毫微米-3微米。70-200毫微米的乳液可以通过过滤杀菌。这种稳定乳液的憎水-亲脂平衡值约为7.5-10.5，优选约为8.0。

在优选的实施方案中，将佐剂组合物同减弱的脂质A衍生物(ALD)混合。ALD的加入增加了该组合物的辅佐性。可用于本发明的ALD包括单磷酰基脂质A和3-脱酰的单磷酰基脂质A。ALD可以浓度为约1微克-12,000微克/毫升包括在配方中。新的稳定的乳液的疫苗组合物也属于权利要求中。

本发明是稳定的水包油乳液的佐剂组合物，其中包括新陈代谢的油、表面活性剂、抗氧化剂以及使乳液等渗的成分。所得到的乳液经缓冲，具有粒径不到3微米，这种稳定乳液的憎水-亲脂平衡值约为7.5-10.5，优选为约8.0。

在优选的实施方案中，这种稳定的乳液包括约2％-15％，优选约为10％体积/体积的新陈代谢的油角鲨烯。在稳定乳液中约有2％表面活性剂。在本发明的稳定乳液中可以加入约50微克的抗氧化剂和约1.75％的使乳液等渗的试剂。

本发明可以使用的新陈代谢的油包括角鲨烯、豆油、芝麻油和MIGLYCOL 810油。角鲨烯是优选的。

本发明可以使用的表面活性剂是Tween 80、CAMPUL PEO-O低PV表面活性剂(ABITEC Corp.,Janesville,WI)、SOLITOL HS15表面活性剂(BASF Corp.,Chicago,IL)以及PLURONIC F68嵌段共聚物(BASFCorp.,Chicago,IL)、胆酸钠、甘油脱氧胆酸盐、磷脂酰胆碱，其中PLURONIC F68嵌段共聚物是优选的。已经发现，将Tween 80和CAMPULPEO-O低PV表面活性剂静脉内给狗时产生组胺型反应。其它适宜的表面活性剂包括神经鞘脂如神经磷脂、神经鞘氨醇，以及磷脂如蛋磷脂酰胆碱、1,2-二肉豆寇酰-顺-丙三氧基-3-.磷酸乙醇胺、L-α-磷脂酰乙醇胺以及1,2-二棕榈酰-顺-丙三氧基-3-磷酸胆碱(DPPC)或它们的混合物。DPPC可以用于人类。

本发明的稳定的乳液中所用的抗氧化剂包括α-生育酚和抗坏血酸，其中α-生育酚是优选的。

可以加到本发明的乳液中使佐剂等渗的试剂包括葡萄糖、甘油、甘露醇、山梨醇、PEG 300、PEG 400以及聚乙二醇。其中，甘油是优选的。