[发明专利]可溶性T细胞受体

权利要求书

1．一种重折叠的重组T细胞受体(TCR)，它包括：

ⅰ)带有第一种异源C-末端二聚化肽的重组TCRα或γ链胞外域；和

ⅱ)带有第二种C-末端二聚化肽的重组TCRβ或δ链胞外域，其中所述的第二种C-末端二聚化肽特异性地与第一种二聚化肽异二聚化而形成异二聚化结构域。

2．一种具有生物活性的重组T细胞受体(TCR)，它包括：

ⅰ)带有第一种异源C-末端二聚化肽的重组TCRα或γ链胞外域；和

ⅱ)带有第二种C-末端二聚化肽的重组TCRβ或δ链胞外域，其中所述的第二种C-末端二聚化肽特异性地与第一种二聚化肽异二聚化而形成异二聚化结构域。

3．根据权利要求1或权利要求2所述的重组TCR，其中存在于与胞质域邻接的α与β或γ与δ链之间天然TCRs中的二硫键不存在。

4．根据权利要求1、2或3所述的重组TCR，其中所述的异二聚化结构域是一种卷曲螺旋结构域。

5．根据权利要求4所述的重组TCR，其中所述的二聚化肽类是c-jun和c-fos二聚化肽类。

6．根据权利要求1-5中任意一项所述的重组TCR，它包括位于TCR链与异二聚化肽类之间的弹性接头。

7．根据权利要求1-6中任意一项所述的重组TCR，将它在大肠杆菌表达系统中表达。

8．根据权利要求1-7中任意一项所述的重组TCR，它在C-末端为生物素标记的。

9．根据权利要求1-8中任意一项所述的重组TCR，将它用一种可检测的标记物来标记。

10．根据权利要求1-9中任意一项所述的重组TCR，将它与一种诸如细胞毒性剂或免疫刺激剂的治疗剂连接。

11．编码权利要求1-7中任意一项所述的重组TCR的重组TCR链的核酸序列。

12．一种根据权利要求11所述的核酸序列，它位于大肠杆菌表达载体中。

13．一种重组非膜结合T细胞受体的制备方法，该方法包括表达：

ⅰ)带有第一种异源C-末端二聚化肽的重组TCRα或γ链胞外域；和

ⅱ)带有第二种C-末端二聚化肽的重组TCRβ或δ链胞外域，其中所述的第二种C-末端二聚化肽特异性地与第一种二聚化肽异二聚化而形成异二聚化结构域；并且在体外使所述链彼此重折叠而产生TCR异二聚体。

14．根据权利要求13所述的方法，其中重折叠步骤在含有增溶剂的重折叠缓冲液中进行。

15．根据权利要求14所述的方法，其中所述的增溶剂是浓度至少为0.1M的尿素。

16．根据权利要求15所述的方法，其中所述的增溶剂是浓度约为5M的尿素。

17．根据权利要求13-16中任意一项所述的方法，其中使所述的链在重折叠前在变性缓冲液中变性。

18．根据权利要求17所述的方法，其中所述的变性缓冲液含有DTT或胍作为还原剂。

19．根据权利要求13-18中任意一项所述的方法，其中所述的TCR是权利要求1-7中任意一项所述的重组TCR。

20．一种通过权利要求13-19中任意一项所述的方法生产的重组TCR。

21．一种权利要求20所述的TCR的多聚体。