[发明专利]癌的早期诊断方法

说明书

本发明涉及癌及癌前期的早期诊断方法，特别是上呼吸道或肛殖道癌的早期诊断方法。

自50年代中期以来对大多数不同的癌已提供了预防计划。关于宫颈癌，主要是基于宫颈的细胞涂片的形态学和细胞学检查，即所谓的Pap测试，其基于妇女从20岁起定期进行的妇科学常规检查。通过细胞的形态学，涂片被分成各种强度程度的发育异常细胞变化。根据Pap I-V，这些强度程度分别代表正常、清度发育异常、稍严重发育异常、严重发育异常和浸润性癌。如果Pap测试产生令人震惊的结果，则进行小规模活组织检查并进行组织病理学检查，由此将发育异常的种类和强度确定并划分为宫颈上皮内癌(CINI-III)。

尽管有预防计划，但是每年增加400000个新病例的宫颈癌仍是妇女中发生频率为第二位的癌症。这特别是由于Pap测试结果的近30％是假阴性所致。

因此，本发明的目的是提供一种可以早期和可靠诊断宫颈癌的方法。另外，由此方法应可以区分肿瘤形成前发育异常的良性炎性改变或化生改变。

根据本发明，这可通过权利要求书中定义的本发明主题实现。

本发明基于申请人的如下观察：即细胞周期调节蛋白在许多癌，例如上呼吸道或肛殖道癌、特别是宫颈癌以及这些癌的前期中过表达。细胞周期调节蛋白的例子为细胞周期蛋白。特别提及的是调节细胞周期蛋白的细胞周期蛋白依赖性激酶，更特别提及的是调节细胞周期蛋白依赖性激酶的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白的例子为蛋白质p14，p15，p16，p19，p21和p27。本申请人发现细胞周期调节蛋白的过表达的强度与细胞发育异常程度相关。

根据本发明，本申请人的观察用作一种癌及癌前期的早期诊断方法，其包括在一机体样品中确定细胞周期蛋白的过表达。

术语“癌及癌前期”包括任何种类和任何起源的癌及其前期。例如，它们可以是上呼吸道或肛殖道癌，特别是宫颈癌。宫颈癌中，特别提及的是其前期，例如宫颈上皮内癌(CINI-III)，原位癌(CIS)等。

术语“细胞周期调节蛋白”包括任何种类和起源的细胞周期调节蛋白。例如，这些蛋白可以是细胞周期蛋白。特别是，它们可以是调节细胞周期蛋白的细胞周期蛋白依赖性激酶。细胞周期蛋白依赖性激酶的例子是蛋白质cdk4和cdk6。更特别地，它们可以是调节细胞周期蛋白依赖性激酶的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白的例子是蛋白质p14，p15，p16，p19，p21和p27，优选的是p16。

术语“机体样品”包括可以检测细胞周期调节蛋白的任何机体样品，这种机体样品的例子是血、涂片、痰、尿、粪便、液体(liquor)、胆汁、胃肠道分泌物、淋巴、骨髓、器官穿刺物或抽吸物和活组织检查样品。当检查肛殖道癌例如宫颈癌时，特别提及的是涂片和活检样品。

术语“确定细胞周期调节蛋白的过表达”包括适于检测细胞周期调节蛋白或其编码mRNA的表达和相应基因的扩增的任何方法。为确定过表达，显然是将待检查的机体样品与来自健康人的相应机体样品相比较，这种样品可作为标准形式存在。细胞周期调节蛋白的(过)表达可在核酸水平和蛋白质水平检测。对于蛋白质水平的检测，可以使用例如针对细胞周期调节蛋白的抗体，这些抗体可用于大多数不同方法中，如Western印迹、ELISA或免疫沉淀。有利的是抗体固定在固相载体如测试条或乳胶颗粒上。

通过本发明，可以早期诊断癌症，即在其前期诊断。

本发明的另一主题涉及进行本发明方法的试剂盒，这种试剂盒包括：

(a)检测细胞周期调节蛋白的表达的试剂，例如针对这种蛋白的抗体，或编码这种蛋白或其部分的核酸，

(b)常规助剂，如缓冲剂、载体、标记物等，和任选地

(c)用于对照反应的制剂，例如一种细胞周期调节蛋白，编码这种蛋白及其部分的核酸，或细胞制备物，例如组织切片或固定在玻片上的细胞。

以上陈述相应地适于所述试剂盒的各组分。另外，可存在各个组分的一或几个代表。

通过本发明，可以早期诊断癌，特别是可以早期诊断癌前期。还可以区分肿瘤形成前发育异常的良性炎性改变或化生改变。另一个特征是本发明方法获得的结果不进行主观评价，因而Pap测试或组织学制备的假阴性和假阳性结果可以避免。另外，本发明可以快速简便地操作，因而可用于深入筛选措施，特别是在第三世界国家中。因此，本发明对现今癌症诊断作出了重要贡献。

附图简述