[发明专利]用于培养动物细胞的培养基和使用该培养基生产蛋白质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于培养动物细胞的培养基，和使用该培养基生产蛋白质的方法。更具体地说，本发明涉及用于培养动物细胞的培养基，该培养基含有一种鱼肉提取物或鱼肉的酶促降解产物，但是不含有哺乳动物衍生的组分如蛋白质或它的分解产物；和使用该培养基生产蛋白质的方法。

背景技术

在培养动物细胞以获得一种由动物细胞产生的天然蛋白质，或在培养一种结合有编码所需要的蛋白质的基因的动物细胞以产生所需要的蛋白质等过程中，必需的营养物如碱、糖、氨基酸和维生素被加入到培养基中。此外，一种哺乳动物衍生的提取物，具体地说，血清如胎牛血清通常以5至20％的量加入以便使动物细胞增殖。但是，这种哺乳动物衍生的血清有许多缺点。它占培养基成本的75至95％，和由于在质量上存在的批间差异，不能获得稳定的增殖。此外，哺乳动物衍生的血清不能在高压灭菌器等中消毒，因此可能被病毒或支原体污染。尽管大多数的这些病毒或支原体是非致病的，但是从稳定生产的观点看它们会变成额外的未知因素。此外，血清含有超过500种类型的蛋白质，因此使从培养基中分离和纯化所需要的蛋白质-细胞产物复杂化。为解决这类关于稳定生产的问题，实行了用一种血清衍生的纯化的蛋白质如胎球蛋白、胰岛素或转铁蛋白代替血清的方法。从生产成本的观点看也尝试了使用从哺乳动物提取的培养基组分的方法。

近年来，人们表现出了对哺乳动物衍生的组分与疯牛病、牛的海绵状脑病(BSE)、传染性海绵状脑病(TSE)和Creutzfeld-Jakob疾病(CJD)之间关系的关注。从安全性方面来看需要开发用于培养动物细胞的培养基，该培养基不含这些哺乳动物衍生的组分。

在动物细胞的培养中，在培养的早期，不向培养基中加入上述哺乳动物衍生的组分会引起细胞存活率的显著下降和培养肉汤中活细胞计数的减少。这些事件使长期培养或大规模培养不可能进行。本发明的目的在于提供用于培养动物细胞的培养基，该培养基不含哺乳动物衍生的组分并且不存在上述问题，和使用该培养基生产蛋白质的方法。

发明的公开

为了达到上述目的，本发明的发明者们从用于培养动物细胞的常规培养基中除去哺乳动物衍生的组分。他们向形成的培养基中加入各种物质，并利用以编码抗体蛋白质的基因转化的CHO细胞进行了深入的研究。研究的目的是获得一种能刺激该CHO细胞增殖的物质，由此产生高浓度的抗体蛋白质。该研究导致发现这一目的可以通过加入一种鱼肉提取物或鱼肉的酶促降解产物来达到，并且基于这一发现，完成了本发明。

即，本发明涉及用于培养动物细胞的培养基，该培养基含有一种鱼肉提取物或鱼肉的酶促降解产物，和用该培养基生产蛋白质的方法。

附图的简要说明

图1是表示在分别含有白利(Brix)1％和白利2％的鱼肉酶促降解产物和10克/升的牛肉水解产物的培养基中培养的CHO细胞的活细胞密度的图。

图2是表示在分别含有白利1％和白利2％的鱼肉酶促降解产物和10克/升的牛肉水解产物的培养基中培养的CHO细胞的存活率(％)的图。

图3是表示在培养基中由在分别含有白利1％和2％的鱼肉酶促降解产物和10克/升的牛肉水解产物的培养基中培养的CHO细胞产生的抗体蛋白质的浓度(毫克/升)的图。

图4表示在实施例5中使用一种摇瓶式细胞培养装置进行细胞培养的结果。在图4中纵轴分别表示活细胞密度、细胞存活率和产生的抗体蛋白质的量。每个横轴代表使用培养基B开始培养后培养的天数。

实施本发明的最佳方式

本发明将通过下文进行详细说明。本文中叙述的所有文件作为参考文献将在本文中被引用。

本发明的培养基是一种用于培养动物细胞的培养基，该培养基含有鱼肉提取物或鱼肉的酶促降解产物。根据本发明，动物细胞能被令人满意地进行培养而不需向培养基(通常已用作动物细胞培养的培养基)中添加哺乳动物衍生的组分。

用于本发明的鱼肉的实例有红肉鱼的鱼肉如狐鲣、护卫鲭、金枪鱼、鲭鱼、太平洋竹刀鱼、沙丁鱼、马鲭、和鲑鱼的鱼肉，及白肉鱼如鳕鱼、日本海刺鳍鱼、右眼鲜鱼、左眼鲜鱼和海鲷科鱼的鱼肉。优选的实例是狐鲣、护卫鲭、鳕鱼、鲭鱼、鲑鱼和沙丁鱼。

用于本发明的鱼肉提取物可通过将鱼肉切成适当的小块或将鱼肉切碎成糊状，并用热水，例如90至95℃的热水，提取肉块或肉糊的可溶性组分几十分钟至几十小时来获得。具体的实例是由用于生产干燥狐鲣的煮过的狐鲣制得的原液和在生产罐装食品过程中的烹调残液。