[发明专利]测定多核苷酸序列变异的方法

权利要求书

1．测定第一种多核苷酸和第二种多核苷酸之间核苷酸序列变异的存在和具体类型的方法，包括：

a)提供第一种多核苷酸的样品；

b)选择第一种多核苷酸可能含有变异的区域；

c)对选定区域进行模板产生扩增反应，以产生包含所选定区域的双链多核苷酸模板群；

d)通过片段产生反应，使用一组引物，同时由模板的两条链产生经标记的线性多核苷酸片段家族其中片段家族的每个片段由终止物于片段的3’末端终止，且其中片段家族包括在以引物为侧翼的模板链部分的每个可能碱基处终止的至少一个片段，用终止物表示；

e)使用片段中存在的标记，测定第一种多核苷酸选定区域中至少一些碱基的定位和具体类型；并

f)将测定的碱基的定位和具体类型与第二种多核苷酸的碱基的定位和具体类型进行比较，由此鉴定第一种多核苷酸选定区域和第二种多核苷酸相应区域之间核苷酸序列变异的存在和具体类型。

2．权利要求1的方法，其中还包括在对选定区域进行模板产生扩增反应之后，对模板进行纯化以除去其它扩增反应成分。

3．权利要求1的方法，其中终止经标记的线性多核苷酸片段家族的终止物是2’,3’-双脱氧终止物。

4．权利要求1的方法，其中第二种多核苷酸相应区域的序列如下测定：

a)对相应区域进行模板产生扩增反应，以产生包含相应区域的第二群双链多核苷酸模板；

b)通过片段产生反应，使用第二组引物，同时由第二模板的两条链产生经标记的线性多核苷酸片段家族2，其中片段家族2的每个片段由终止物于片段的3’末端终止，且其中片段家族2包括在以第二引物为侧翼的两条模板链部分的每个可能碱基处终止的至少一个片段，用终止物表示；并

c)使用片段家族2中存在的标记，测定第二种多核苷酸选定区域中至少一些这样的碱基的定位和具体类型。