[发明专利]细小病毒衣壳颗粒抑制细胞增生及迁移的用途

说明书

发明领域

本发明涉及抑制细胞生长和迁移的方法和组合物的发现。更确切地，B19细小病毒衣壳或B19细小病毒衣壳蛋白片段可用于生产药物，这些药物施用于受试者以抑制含有P抗原的细胞(包括但不限于造血源细胞和内皮细胞)的生长和/或迁移。

发明背景

B19细小病毒是一种人致病原，它与患免疫妥协或溶血性贫血的患者的不同的临床症状，从中度症状(传染性红斑)到更为严重的疾病相联系。胎儿水肿和宫内胎儿死亡是孕期B19感染的众所周知的综合征(Anderson和Young，病毒学专论(Monographs in Virology)，20(1997))。B19细小病毒颗粒呈二十面体对称，直径18-26nm，由60个衣壳蛋白组成，大约95％为主要衣壳蛋白(VP2)，其分子量为58 kd。(Fields等人，病毒学(Virology)，2卷，3版，宾西法尼亚，费城，LipponcottRaven出版社出版，2202页(1996))，构成B19细小病毒衣壳的大约3-5％的衣壳蛋白为分子量83kd的次要衣壳蛋白质(VP1)，VP1与VP2的不同是在氨基端的额外227个氨基酸(参考文献同上)。

B19细小病毒特别容易感染人红细胞和骨髓培养物。例如，B19细小病毒与人红细胞系先祖细胞结合，通过在这些细胞中复制而抑制造血集落形成。(Brown等人，科学(Science)，262：114(1993)；Mortimer等人，自然(Nature)，302：426(1983))。感染个体的骨髓样本中也发现造血细胞抑制，导致暂时性贫血，个别情况出现暂时性各类血细胞减少。(Saunders等人，英国血液学杂志(Br J Haematol)，63：407(1986))。进一步发现，在天然和试验性人体感染中，B19细小病毒引起骨髓抑制。(Anderson和Young，病毒学专论，20(1997))。

已鉴定出B19细小病毒的细胞受体为红细胞糖苷脂或红细胞P抗原，一种四己糖神经酰胺(tetrahexoceramide)。(Fields等人，病毒学，2卷，3版，宾西法尼亚，费城，Lipponcott Raven出版社出版，2204页(1996))。P抗原见于成熟的红细胞、红细胞系先祖细胞、巨核细胞、内皮细胞、肾皮质、胎盘、胎儿心肌(von dem Brone等人，英国血液学杂志，63：35(1986))和胎肝中的原红细胞(Morey和Flemming，英国血液学杂志，82：302(1992))中。先天缺乏P抗原的个体对B19细小病毒感染不敏感，给予过量P抗原或抗P抗原的单克隆抗体可保护红细胞系先祖细胞免受B19细小病毒的感染。(参考文献同上)

另外，还生产了能识别B19细小病毒颗粒的几个区域的中和抗体。例如，针对VP2抗原决定簇，比如见于氨基酸38-87、253-272、309-330、328-344、359-382、449-468和491-515中，及VP1的特有区域的单克隆抗体可中和B19细小病毒(Fields等人，病毒学，2卷，3版，宾西法尼亚，费城，Lipponcott Raven出版社出版，2207页(1996))。

也已开发出用于生产B19细小病毒抗原的基因工程表达体系(Kajigaya等人，美国国家科学院院报(Proc Natl Acad SciUSA)，86：7601(1989)；Kajigaya等人，美国国家科学院院报，88：4646(1991).)。在杆状病毒体系中产生的重组B19细小病毒衣壳，与天然颗粒一样由VP1和VP2组成，这些衣壳蛋白自我组装成病毒样颗粒(VLP)。(Kajigaya等人，美国国家科学院院报，86：4646(1991))。对B19细小病毒衣壳的电子显微镜分析表明，VLP的结构与血浆衍生的病毒颗粒相类似(Kajigaya等人，美国国家科学院院报，86：4646(1991))。B19 VLP目前正被评价为一种潜在的抗B19细小病毒感染的疫苗，初步结果表明其具有良好的中和作用且没有严重的不良反应。(Bostic等人，感染病学杂志(J.Infect.Dis.)，179：619(1999))。许多人正尝试施用B19衣壳来防止B19细小病毒感染，但还没有人试图利用B19细小病毒衣壳、B19衣壳蛋白或其片段的性质以开发新的抑制细胞增生或迁移的药物。

发明简述