[发明专利]佐剂系统及疫苗

说明书

本发明涉及改进的疫苗、佐剂系统以及制备这样的疫苗和佐剂系统的方法。具体地说，本发明的疫苗和佐剂系统包括金属盐以及其它免疫刺激剂如单磷酰脂质A或其衍生物、Quil A或其衍生物、或免疫刺激性寡核苷酸如CpG。

在本领域内，众所周知铝盐提供了具有佐剂活性的安全赋形剂。据认为这些佐剂的作用机制包括形成抗原储存库(antigen depot)以致抗原可以在给予后滞留在注射位点长达3周，以及形成更易被抗原呈递细胞摄入的抗原/金属盐复合物。除铝外，已经使用其它金属盐来吸附抗原，包括锌盐、钙盐、铈盐、铬盐、铁盐以及铍盐。铝的氢氧化物和磷酸盐是最常用的。

包含铝盐、抗原以及其它免疫刺激剂的疫苗制剂是本领域内已知的。比起由铝盐和抗原单独刺激的免疫反应，这样的制剂引起更强烈的免疫反应。这些疫苗制备物的配制以前涉及特殊的生产过程，因为据认为要发生最佳的免疫反应，必须使抗原吸附于免疫刺激剂所吸附的同一铝盐颗粒上。这样，当抗原呈递细胞摄入抗原时，共吸附的免疫刺激剂直接对同一抗原呈递细胞施加其刺激作用。

在EP0576 478 B1、EP0689 454 B1和EP 0 633 784 B1中描述了基于铝的疫苗制剂，其中抗原和免疫刺激剂3-脱氧酰化单磷酰脂质A(3-de-O-acylated monophosphoryllipid A)(3D-MPL)吸附于同一颗粒。在这些情况下，首先使抗原吸附到铝盐上，随后使免疫刺激剂3D-MPL吸附于同一铝盐颗粒。这样的过程首先涉及在水浴中通过超声处理而悬浮3D-MPL，直到颗粒达到80到500nm之间的大小。一般在室温下，在搅拌的同时使抗原吸附在铝盐上一小时。然后将所述3D-MPL悬浮物加入已吸附的抗原，并将所述制剂在室温下温育1小时，随后在4℃保存备用。

从免疫的观点上看，所述在先技术的配制方法提供了有效的疫苗，但是，它们也包含一些商业缺陷。为使得疫苗适于给予人类，所述方法必须保持一致并服从生产质量管理规范(GMP)控制以及质量控制(QC)。在一些情况下，所述在先技术的方法提供了其中一种抗原或多种抗原全部吸附到同一金属盐颗粒上的疫苗。然后3D-MPL要吸附于同一金属颗粒的要求也使得该方法复杂化。在包含多种抗原的联合疫苗的情况下，可能是特别成问题的(多种抗原的吸附依赖于每种抗原在特定pH下对特定金属盐的亲和力)。根据存在何种抗原，所述在先技术的方法可能在重复生产能力和疫苗QC上存在问题。此外，如果在一种特定抗原的QC中发生任何事故或可能导致疫苗污染的事件，这有可能导致所有各个成分的浪费，而不仅仅是出现问题的特定抗原的浪费。另外，在一些情况下，联合疫苗可能要求顺序加入抗原，这样一个过程是极其耗时并且昂贵的。因此，所述在先技术的方法复杂、不易控制并且昂贵。

惊人的是，本发明人已经发现不必将抗原和免疫刺激剂吸附于同一颗粒。与本领域内已经接受的观点不同，已经发现当抗原吸附于从免疫刺激剂结合的那些金属盐颗粒分离的特定金属盐颗粒上时，可以产生令人满意的疫苗。

所述改进过程包括吸附免疫刺激剂到金属盐颗粒上，接着使抗原吸附于另一金属盐颗粒，随后混合所述分离的金属颗粒以形成疫苗。本发明还为佐剂组合物提供了吸附于金属盐颗粒的免疫刺激剂，其特征在于所述金属盐颗粒基本不含其它抗原。此外，本发明还提供了疫苗，所述疫苗的特征在于免疫刺激剂吸附于基本不含其它抗原的金属盐颗粒，并且吸附抗原的金属盐颗粒基本不含其它免疫刺激剂。

因此，本发明提供了包含已经吸附到金属盐颗粒上的免疫刺激剂的佐剂制剂，其特征在于所述组合物基本不含其它抗原。此外，该佐剂制剂是在本发明的生产疫苗的方法中要求的中间体。因此，提供了生产疫苗的方法，所述方法包括将本发明的所述佐剂组合物与抗原混合。所述抗原最好已经预吸附到金属盐上。所述金属盐可以与吸附所述免疫刺激剂的金属盐相同或相似。

本发明还提供了疫苗组合物，所述组合物包含吸附于第一种金属盐颗粒的免疫刺激剂以及吸附于金属盐的抗原，其特征在于所述第一种金属盐颗粒和所述第二种金属盐颗粒是不同的。

或者，构成本发明的部分的疫苗包括两组主要的复合物，第一组复合物包括(a)吸附于金属盐颗粒的免疫刺激剂，特征在于所述金属盐颗粒基本不含抗原；而第二组复合物包括(b)吸附于金属盐颗粒的抗原。所述疫苗组合物也可包括两组主要的复合物，第一组复合物包括(a)吸附于金属盐颗粒的免疫刺激剂，特征在于所述金属盐颗粒基本不含抗原；第二组复合物包括(b)吸附于金属盐颗粒的抗原，特征在于所述金属盐颗粒基本不含免疫刺激剂。