[发明专利]抗原生动物的皂角苷类

说明书

本发明是关于从紫金牛(Myrsinaceae)科植物中分离抗原生动物皂角苷类的方法及该皂角苷类制备药物的用途，该药物用于治疗感染利什曼原虫属原生动物寄生虫的宿主(人类及动物)，及减轻该宿主中利什曼原虫病的临床表现形式及治愈利什曼原虫病。

利什曼原虫病有许多不同的疾病表现形式，其严重性及对健康的影响显著不同。首先，利什曼原虫病是一种由许多种利什曼原虫中的任何一种引起的衰弱症状，可经许多种沙蚊传染。利什曼原虫病很多且对大众健康的重要性远超过人们先前的认知。要控制利什曼原虫的感染非常复杂，因为许多种类的沙蚊是可能的传染媒介，而许多动物都可作储病媒的宿主，所以诊断方法(临床、血清、寄生虫诊断)的诊断价值往往无效或只能有限度的接受。

利什曼原虫病的表现形式可为内脏型、粘液皮肤型及/或皮肤型，感染生物体的菌株及宿主的免疫状态均可影响寄生虫疾病的临床表现形式及结果。治疗利什曼原虫病须要复杂及长期的全身的治疗。治疗的目的是治愈人类或动物病患细胞内的寄生虫感染，预防旧病复发，避开不反应性的发生及使住院及总治疗费用降至最小。为达此目的，必须在适当的期间投用适当剂量含量及频率的适当药物。虽然努力的寻找有效的及耐受性良好的抗利什曼原虫的药剂，仅发现少数药剂可用于病人。目前有两种五价的锑化合物可经深部肌肉内注射投用，通常用作为第一线的药物；葡萄糖甲胺锑酸盐(GlucantimTM，Farmitalia)及葡萄糖酸锑钠(PentostamTM，Wellcome)。第二线的药物是两性霉素(amphothericin)-B(尤其是微脂粒的调制剂)、戊脒及别嘌呤醇。现行的治疗效果不佳且会对病人引起毒性副作用。此外，其活性范围不广。因此仍须要新颖的药物。本文确认的新颖的活性成分可用于治疗利什曼原虫属的原生动物寄生虫引起的病症。

出乎意料地，分离自紫金牛杜茎山(Maesa)属的顶花杜茎山(Maesa balansae)及兰赛兰特杜茎山(M.Lanceolata)植物的三萜烯皂角苷类具有强大预防及治疗利什曼原虫的效用。

本发明是关于从紫金牛科植物中分离出三萜烯皂角苷类的方法，其中该方法包含以下的步骤：

(a)用非极性溶剂从干燥的植物部份中去除非极性物质，

(b)用醇类萃取所述植物部份，及

(c)在醇类萃取物中用液-液萃取、过滤及色层分析法进一步的纯化皂角苷类。

特定言之，非极性溶剂为卤化烃，例如：二氯甲烷或氯仿；而醇类则为甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇，各视需要地与水预混合。特别适用者为甲醇∶水(90∶10)混合物或乙醇∶水(70∶30)混合物以供分离内含皂角苷类的级份。

醇类萃取物内的皂角苷类可用以下的方法进一步的纯化：

(c1)蒸发干燥萃取物，

(c2)用丁醇及水分配残余物，

(c3)蒸发干燥有机层，

(c4)在酮类中清洗残余物，以及

(c5)过滤粗皂角苷混合物。

于步骤(c2)中，水层以用正丁醇萃取数次较佳。

本发明也关于另一种从紫金牛科植物分离三萜烯皂角苷类的方法，其中该方法包含以下的步骤：

(a)用醇类萃取干燥的植物部份以及浓缩萃取物，

(b)从萃取物中用非极性溶剂进行液-液萃取法去除非极性级份，及

(c)进一步的用液-液萃取、过滤及色层分析法纯化醇类萃取物中的皂角苷类。

特定的醇类为甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇，各视需要地与水混合，较佳者为乙醇∶水(70∶30)混合物；非极性溶剂为烃，例如：己烷。

醇类萃取物中的皂角苷类可进一步的用以下的方法纯化：

(c6)用以水饱和的丁醇来萃取水溶性级份，

(c7)蒸发干燥有机层，

(c8)在酮类中清洗残余物，以及

(c9)过滤粗皂角苷混合物，

于步骤(c6)中，水层以用正丁醇萃取数次较佳。

当从杜茎山属植物中分离皂角苷类时，色层分析法可包含使用以下梯度洗脱液系统的反相液相色层分析法：

A：0.5％乙酸铵水溶液

B：甲醇

C：乙腈

其中在t＝0时，(A∶B∶C)＝(60∶20∶20)及在t＝结束时，(A∶B∶C)＝(0∶50∶50)，或使用硅胶的正相液相色层分析法。

此类方法产生的混合物基本上是由皂角苷类组成。实验部份中描述的许多药理实验是用此皂角苷类混合物。为了区别其构造，将此混合物用描述于实验部份的HPLC方法分离成个别的成分。