[发明专利]生产抗坏血酸中间体的方法

权利要求书

1.一种由碳源非发酵生产KDG或DKG的方法，包括：通过至少一个氧化酶促活性酶促氧化该碳源获得KDG或DKG。

2.权利要求1的方法，其中所述KDG进一步转化成异抗坏血酸盐。

3.权利要求1的方法，包括通过第一个氧化酶促活性将碳源氧化获得第一个氧化产物，并通过第二个氧化酶促活性将所述第一个氧化产物氧化获得KDG。

4.权利要求3的方法，其中所述第一个氧化酶促活性为一GDH活性并且所述第二个氧化酶促活性为一GADH活性。

5.权利要求1的方法，该方法在含有宿主细胞的环境中进行。

6.权利要求5的方法，其中所述宿主细胞为不能生活的。

7.权利要求5的方法，其中所述宿主细胞为活的。

8.权利要求5的方法，其中至少一个氧化酶与所述宿主细胞膜结合。

9.权利要求1的方法，其中至少一个氧化酶促活性在溶解状态中。

10.权利要求8的方法，其中所述宿主细胞在编码KDGDH活性的天然存在的核酸中含有一突变。

11.权利要求5的方法，其中所述宿主细胞为肠杆菌科的成员。

12.权利要求11的方法，其中所述成员为一泛菌属菌种。

13.权利要求1的方法，其中至少一种氧化酶促活性被固定化。

14.权利要求3的方法，还包括下列步骤：通过至少一种氧化酶将KDG酶促氧化成一氧化产物；和通过至少一种还原酶将所述氧化产物酶促还原成2-KLG。

15.一种由碳源非发酵生产2-KLG的方法，包括任意顺序的以下步骤：通过至少一个氧化酶促活性将碳源酶促氧化成一氧化产物；和通过至少一种还原酶将所述氧化产物酶促还原成2-KLG。

16.权利要求15的方法，其中所述碳源为KDG。

17.权利要求15的方法，其中所述氧化酶促活性需要氧化形式的酶促辅因子，所述还原酶促活性需要还原形式的所述酶促辅因子，并且其中所述氧化形式的所述辅因子和所述还原形式的所述辅因子在至少一个氧化步骤和至少一个还原步骤之间再循环。

18.权利要求15的方法，包括任意顺序的以下步骤：

a.通过第一个氧化酶促活性将碳源酶促氧化成第一个氧化产物；

b.通过第二个氧化酶促活性将第一个氧化产物酶促氧化成第二个氧化产物；

c.通过第三个氧化酶促活性将第二个氧化产物酶促氧化成第三个氧化产物；

d.通过一还原酶促活性将第三个氧化产物酶促氧化成2-KLG。

19.权利要求18的方法，其中所述第一、第二和第三个氧化酶促活性中至少一个需要一氧化形式的酶促辅因子，所述还原酶促活性需要一还原形式的所述酶促辅因子，并且其中所述氧化形式的所述辅因子和所述还原形式的所述辅因子在至少一个氧化步骤和该还原步骤之间再循环。

20.权利要求19的方法，其中所述第一个氧化酶促活性需要一氧化形式的所述酶促辅因子。

21.权利要求18的方法，其中所述碳源为葡萄糖，所述第一个酶促活性为一葡萄糖脱氢酶活性。

22.权利要求21的方法，其中所述葡萄糖脱氢酶活性可从细菌、酵母或真菌源获得。

23.权利要求22的方法，其中所述葡萄糖脱氢酶活性可从包括嗜酸热细菌、甲隐球菌和杆菌属菌种的源获得。

24.权利要求19的方法，其中所述第一、所述第二和所述第三个酶每个都为一脱氢酶活性。

25.权利要求19的方法，其中所述第一、所述第二、所述第三和所述第四个酶促活性中至少一种被固定化。

26.权利要求19的方法，其中所述第一、所述第二、所述第三和所述第四个酶促活性中至少一种在溶解状态中。

27.权利要求25的方法，其中所述第二个酶为一GADH活性。