[发明专利]前列腺素转运蛋白和凋亡

说明书

技术领域

本发明涉及凋亡调控物质、细胞保护剂、凋亡诱导剂及其筛选方法和应用。

背景技术

前列腺素转运蛋白(以下称作PGT)，在生物体内具有以载体介导(carrier-mediated)方式输送前列腺素类物质的性质。前列腺素借助PGT透过生物膜，在细胞内发挥其生理活性，或被酶等分体代谢。现已知PGT存在于生物体的肺、肾脏、脑等器官中，编码PGT的基因序列也已明确(Science，268卷，866-869页，1995年)。

穿过PGT的物质中的一种是前列腺素(以下称作PG)。据报道，PG存在有多种类型，尤其是在肺PGT的透过实验中，高速透过(Km)的有前列腺素E₁(PGE₁)、前列腺素E₂(PGE₂)(参照上述文献)。

PG类作为自体有效物质，在生物体内发挥多种生理活性。其中有改善神经障碍、抑制神经细胞凋亡等对神经细胞保护作用的报道(特开平8-277222号公报)。但是，有关PG类对细胞、尤其是神经细胞的保护作用的机理尚不明确。

近年，有关细胞组织死亡，以凋亡(apoptosis)倍受人们的关注。凋亡是指细胞自身灭亡或自然死亡的意思。这种凋亡与病理学上的细胞死亡即坏死不同，它是整合了遗传信息的细胞自身的自动死亡。也就是说，任何外部的或内部的重要因素活化诱导凋亡的信号，细胞自身就自动地崩溃、直到死亡。有关PGT与凋亡的关系未见报道。

发明公开

本发明的目的是提供利用PGT与凋亡的关系的各种技术，包括通过PGT的抑制或导凋亡、应用PGT进行凋亡调控物质的筛选及其筛选物质的应用，应用抑制凋亡物质的PGT表达细胞的培养技术。

本发明者们考虑到上述情况，进行了研究，结果首次证实了PGT与凋亡的关系。即成功地首次阐明通过PGT产生凋亡作用。具体而言，本发明发现使用对PGT有阳性作用的物质，能抑制凋亡保护细胞，相反，使用对PGT有阴性作用的物质能诱导凋亡。

也就是说，本发明的凋亡调控物质的筛选方法是以通过对PGT的作用筛选侯选物质为特征的。为此，对PGT的作用可以是测定通过介助PGT的细胞内的摄取量，也可以是测定通过介助PGT的细胞内的摄取速度。

本发明的凋亡调控物质的筛选方法，还可以是通过能阻碍PGT功能或PGT表达来测定对PGT作用的方法。

本发明的凋亡调控物质的筛选方法可以是选择对PGT的有作用，且基本上无降压作用的物质为特征的方法。

本发明的凋亡调控物质是用本发明的凋亡调控物质的筛选方法筛选出的物质。

本发明的细胞保护剂是以具有通过PGT而被细胞内吞的机能、且具有抑制凋亡作用功效的凋亡调控物质为有效成分。其中，通过PGT而被细胞内吞的机能是至少以70f mol/mg蛋白/10分钟的摄取量的细胞保护剂。另外，通过PGT而被细胞内吞的机能是用大约100nM(Km)以下的透过速度表示的有PGT亲和性的细胞保护剂。再者，本发明的细胞保护剂，其作用对脑细胞、神经细胞或肾细胞的作用。另外，本发明的细胞保护剂的特征是基本上设有降压作用。

本发明的凋亡诱导剂是以具有PGT功能或对PGT表达有阻抑作用且能诱导凋亡功效的凋亡调控物质为有效成分。其中，凋亡调控物质可以是抗PGT抗体或PGT反义物质。

本发明的细胞保护剂，是从凋亡调控物质PGK₁、PGK₂或二环PGE₂中选择的细胞保护剂。

本发明的PGT表达细胞的培养方法，其特征在于，应用添加了以具有抑制凋亡作用的凋亡调控物质为有效成分的细胞保护剂的培养基。其中，所添加的细胞保护剂的特征在于，它具有通过PGT而被细胞内吞的作用。还有一个特征是添加的细胞保护剂为PGE₁。

本发明的凋亡调控方法，其特征在于，施用上述本发明的细胞保护剂或凋亡诱导剂的有效量。

本发明的凋亡诱导剂的使用，其特征在于，以制备凋亡调控药剂为目的，使用上述本发明的细胞保护剂或凋亡诱导剂。

本发明的最佳实施方案

以下对本发明进行具体说明。

(A)凋亡调控物质的筛选方法

本发明的凋亡调控物质的筛选方法的特征是，以侯补物质对PGT的作用为指标来筛选所期望的物质。所谓凋亡调控物质是指具有抑制凋亡作用的物质，或者具有诱导凋亡作用的物质。本发明的凋亡调控物质是具有抑制或诱导PGT功能或PGT表达作用的物质。

①具有抑制凋亡作用的物质的筛选方法