[发明专利]用新外植体进行农杆菌介导的棉花转化

权利要求书

1、一种产生转基因棉花植物的方法，包括如下步骤：

(a)获得棉花须根外植体，

(b)培养须根外植体以诱导愈伤组织形成，

(c)将根愈伤组织与携带含外源基因和选择标记的载体的根癌农杆菌培养物接触，所述农杆菌能使该外源基因和选择因子抗性基因稳定转移进愈伤组织细胞的基因组，

(d)在所述选择因子抗性基因赋予针对其的抗性的选择因子存在下培养愈伤组织以选择转化的细胞，

(e)在所选的愈伤组织培养物中诱导体细胞胚胎形成，以及

(f)将诱导的体细胞胚胎再生成完整的转基因棉花植物。

2、权利要求1的方法，其中棉花须根外植体是通过在多效三唑存在下培养棉花籽苗而获得。

3、权利要求2的方法，其中多效三唑的浓度为约0.05mg/l-0.2mg/l。

4、权利要求3的方法，其中多效三唑的浓度为约0.1mg/l。

5、权利要求2的方法，其中棉花籽苗在还存在α-萘乙酸的条件下培养。

6、权利要求5的方法，其中α-萘乙酸的浓度为约0.01mg/l-0.2mg/l。

7、权利要求6的方法，其中α-萘乙酸的浓度为约0.05mg/l。

8、权利要求1的方法，其中体细胞胚胎再生步骤在多效三唑存在下进行。

9、权利要求8的方法，其中其中多效三唑的浓度为约0.05mg/l-0.2mg/l。

10、权利要求9的方法，其中多效三唑的浓度为约0.1mg/l。

11、权利要求8的方法，其中体细胞胚胎再生步骤在还存在α-萘乙酸的条件下培养。

12、权利要求11的方法，其中α-萘乙酸的浓度为约0.01mg/l-0.2mg/l。

13、权利要求12的方法，其中α-萘乙酸的浓度为约0.05mg/l。

14、权利要求1的方法，其中诱导愈伤组织形成的步骤在包含肌醇、维生素B₁和二甲基烯丙基(氨基)嘌呤的愈伤组织诱导培养基中进行。

15、权利要求1的方法，其中诱导体细胞胚胎形成的步骤在包含肌醇、维生素B₁和二甲基烯丙基(氨基)嘌呤的体细胞胚胎诱导培养基中进行。

16、权利要求14的方法，其中愈伤组织诱导培养基包含50mg/L-150mg/L的肌醇，0.2-10mg/L的维生素B₁和0.1-7.5mg/L的二甲基烯丙基(氨基)嘌呤。

17、权利要求16的方法，其中愈伤组织诱导培养基包含100mg/L的肌醇，0.4mg/L的维生素B₁和5mg/L的二甲基烯丙基(氨基)嘌呤。

18、权利要求15的方法，其中体细胞胚胎诱导培养基包含50mg/L-100mg/L的肌醇，0.2-10mg/L的维生素B₁和0.01-0.5mg/L的二甲基烯丙基(氨基)嘌呤。

19、权利要求18的方法，其中体细胞胚胎诱导培养基包含100mg/L的肌醇，0.4mg/L的维生素B_l和5mg/L的二甲基烯丙基(氨基)嘌呤。

20、权利要求1的方法，其中诱导愈伤组织形成的步骤在包含维生素B5、(2，4-二氯苯氧基)乙酸、MgCl₂和葡萄糖的愈伤组织诱导培养基中进行。

21、权利要求1的方法，其中诱导体细胞胚胎形成的步骤在包含维生素B₅、(2，4-二氯苯氧基)乙酸、MgCl₂和葡萄糖的体细胞胚胎诱导培养基中进行。

22、权利要求20的方法，其中愈伤组织诱导培养基包含0.2mg/L-10mg/L维生素B₅、0.05mg/L-0.15mg/L(2，4-二氯苯氧基)乙酸、0.4mg/L-1.2mg/L MgCl₂和1％-5％葡萄糖。