[发明专利]单克隆抗体、抗原和恶性疾病的诊断和治疗

说明书

发明领域

本发明涉及单克隆抗体的新序列、与该单克隆抗体结合的抗原的肽序列，以及利用单克隆抗体和肽的诊断和治疗方法。

发明背景

公开号为No.WO95/20605，由申请人共同拥有的PCT专利申请公开了免疫刺激性单克隆抗体。该PCT申请的主题抗体针对B类淋巴母细胞而产生并表现出具有免疫刺激的效果。当向发生肿瘤的动物体内注射时，发现这些抗体也具有引发抗肿瘤的效果。

在目前的医疗程序下，对癌症的诊断一般是一个涉及身体检查、使用不同的成像技术、使用不同的癌症标示物等的多步骤程序。在癌症的诊断技术领域一直有一个长期的需求，即能够检查出癌症并确定被检查的人员所患癌症的种类。

发明的总体描述

本发明的基础是发现了针对类淋巴母细胞的单克隆抗体的序列。本发明的另一个基础是发现了这些抗体同癌症病人的T细胞的结合水平与同健康人的T细胞的结合水平不同(更高或更低)。

根据本发明的一个方面，本发明提供了具有可变区的单克隆抗体，其选自：

(a)其重链可变区包括图1所示氨基酸序列的单克隆抗体；

(b)其κ轻链可变区包括图2所示氨基酸序列的单克隆抗体；

(c)其重链可变区包括图1所示氨基酸序列且κ轻链可变区包括图2所示氨基酸序列的单克隆抗体；

(d)其重链可变区与图1所示氨基酸序列具有至少70％同一性的单克隆抗体；

(e)其轻链可变区与图2所示氨基酸序列具有至少70％同一性的单克隆抗体。

根据本发明，术语“抗体”是指IgG、IgM、IgD、IgA和IgE类中的任何一类的单克隆抗体。该术语是指完整抗体或包括抗体的抗原结合区的抗体片段，例如缺少Fc部分的抗体、单链抗体、基本上仅包括抗体的可变抗原结合区的节(article)片段等。

此外，本发明还涉及与抗原结合的抗体，上述单克隆抗体中任何一种特异性地与该抗原结合，即与上述抗体具有交叉反应性的抗体。

按照本发明的一个实施方案，所述单克隆抗体是一个嵌合的人-鼠抗体，即具有人源恒定区和鼠源可变区的单克隆抗体(mAb)。出于此种目的，本发明单克隆抗体的κ轻链和重链的可变区以PCR法克隆并测定其DNA序列。按照本发明的另一个实施方案，抗体是一个完全人源化抗体，即其可变区和恒定区均取自人。

“具有至少X％同一性”术语是指当对序列进行最佳对比时，在两个对比序列中相同的氨基酸残基的比例。因此，70％氨基酸序列同一性是指在两个或多个最佳对比的多肽序列中有70％的氨基酸是相同的。优选同一性为80％，最优选为90％。

根据本发明的另外一个方面，提供了产生本发明的任何单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞系。杂交瘤可以由本领域中的任何已知技术制备(例如，Kohler，G.和Milstein，C.，Nature，256：495-497，(1975))。杂交瘤细胞系的上清液一般通过本领域的任何已知的方法筛选其抗体结合活性，例如酶联免疫吸附测定法(ELISA)或放射免疫测定法(RIA)。筛选上清液以制备单克隆抗体，该单克隆抗体同本发明的任何肽链(如下文说明)结合或同与之结合的细胞，例如Daudi细胞或T淋巴细胞相结合。

编码上述单克隆抗体的重链或轻链的任何氨基酸序列的DNA序列也包括在本发明的范围内。毫无疑问，本领域的任何熟练技术人员都清楚，由于遗传密码的退化性状，多数核酸序列可编码本发明的单克隆抗体，除了图1或2所示的那些。

本发明还提供了例如具有所述DNA序列的质粒的表达载体以及包含一个或多个所述表达载体的宿主细胞。

按照本发明的另外一个方面，本发明提供了本发明的单克隆抗体能够与之结合的B细胞抗原的肽序列。针对非冗余基因库数据库和EST分区所实施的检索表明该肽序列是新的。

按照本发明的这一方面，本发明提供了选自下述的肽：

(a)具有图10所示的氨基酸序列的肽；

(b)具有图11所示的氨基酸序列的肽；

(c)具有图12所示的氨基酸序列的肽；

(d)与上述(a)、(b)和(c)肽的氨基酸序列的任何一个具有至少85％同一性的肽；

(e)包括一个或多个上述(a)-(d)肽链的蛋白质或肽。

本发明的肽可以用于不同的诊断分析，例如竞争性免疫分析，该分析可以确定本发明的单克隆抗体与存在于T细胞上的其天然抗原的结合水平。此外，该肽可以用于在免疫动物体内产生抗体，然后该抗体可以被用于上文或下文所描述的任何一种功能。