[发明专利]耐高温β－葡萄糖苷酸酶基因及其获得方法

摘要

一种耐高温GUS基因,是通过DNA突变过程获得GUS突变基因,再构建成表达载体,转化入大肠杆菌中,进行耐高温性筛选获得的耐85℃的耐高温GUS基因克隆,并对耐高温GUS基因进行了序列测定,结果表明该耐高温GUS基因具有1812个核苷酸。耐高温GUS基因可简便地应用于转基因植物转化体的筛选,极大地提高转基因植株的检测效率,促进植物转基因研究的发展。

主权项

1、一种耐高温GUS基因，其特征在于具有如下的DNA核苷酸序列及所编码的氨基酸序列：       10           20           30            40ATG TTA CGT CCT GTA GAA ACC CCA ACC CGT GAA ATC AAA AAA CTCMET Leu Arg Pro Val Glu Thr Pro Thr Arg Glu Ile Lys Lys Leu50           60            70           80           90GAC GGC CTG TGG GCA TTC AGT CTG GAT CGC GAA AAC TGT GGA ATTAsp Gly Leu Trp Ala Phe Ser Leu Asp Arg Glu Asn Cys Gly Ile      100         110           120           130GAT CAG CGT TGG TGG GAA AGC GCG TTA CAA GAA AGC CGG GCA ATTAsp Gln Arg Trp Trp Glu Ser Ala Leu Gln Glu Ser Arg Ala Ile  140           150           160          170          180GCT GTG CCA GGC AGT TTT AAT GAT CAG TTC GCC GAT GCA GAT ATTAla Val Pro Gly Ser Phe Asn Asp Gln Phe Ala Asp Ala Asp Ile      190           200          210           220CGT AAT TAT GCG GGC AAC GTC TGG TAT CAG CGC GAA GTC TTC ATAArg Asn Tyr Ala Gly Asn Val Trp Tyr Gln Arg Glu Val Phe Ile   230          240           250          260          270CCG AAA GGT TGG GCA GGC CAG CGT ATC GTG CTG CGT TTC GAT GCGPro Lys Gly Trp Ala Gly Gln Arg Ile Val Leu Arg Phe Asp Ala      280          290          300            310GTC ACT CAT TAC GGC AAA GTG TGG GTC AAT AAC CAG GAA GTG ATGVal Thr His Tyr Gly Lys Val Trp Val Asn Asn Gln Glu Val MET   320          330           340          350          360GAG CAT CAG GGC GGC TAT ACG CCA TTT GAA GCC GAT GTC ACG CCGGlu His Gln Gly Gly Tyr Thr Pro Phe Glu Ala Asp Val Thr Pro      370          380          390           400TAC GTT ATT GCC GGG AAA AGT GTA CGT ATC ACC GTT TGT GTG AACTyr Val Ile Ala Gly Lys Ser Val Arg Ile Thr Val Cys Val Asn   410          420           430          440          450AAC GAA CTG AAC TGG CAG ACT ATC CCG CCG GGA ATG GTG ATT ACCAsn Glu Leu Asn Trp Gln Thr Ile Pro Pro Gly MET Val Ile Thr      460          470          480           490GAC GAA AAC GGC AAG AAA AAG CAG TCT TAC TTC CAT GAT TTC TTTAsp Glu Asn Gly Lys Lys Lys Gln Ser Tyr Phe His Asp Phe Phe   500          510           520          530          540AAC TAT GCC GGA ATC CAT CGC AGC GTA ATG CTC TAC ACC ACG CCGAsn Tyr Ala Gly Ile His Arg Ser Val MET Leu Tyr Thr Thr Pro      550          560          570           580AAC ACC TGG GTG GAC GAT ATC ACC GTG GTG ACG CAT GTC GCG CAAAsn Thr Trp Val Asp Asp Ile Thr Val Val Thr His Val Ala Gln   590          600           610          620          630GAC TGT AAC CAC GCG TCT GTT GAC TGG CAG GTG GTG GCC AAT GGTAsp Cys Asn His Ala Ser Val Asp Trp Gln Val Val Ala Asn Gly      640          650          660       670GAT GTC AGC GTT GAA CTG CGT GAT GCG GAT CAA CAG GTG GTT GCAAsp Val Ser Val Glu Leu Arg Asp Ala Asp Gln Gln Val Val Ala   680          690           700          710          720ACT GGA CAA GGC ACT AGC GGG ACT TTG CAA GTG GTG AAT CCG CACThr Gly Gln Gly Thr Ser Gly Thr Leu Gln Val Val Asn Pro His      730          740          750           760CTC TGG CAA CCG GGT GAA GGT TAT CTC TAT GAA CTG TGC GTC ACALeu Trp Gln Pro Gly Glu Gly Tyr Leu Tyr Glu Leu Cys Val Thr   770          780           790          800          810GCC AAA AGC CAG ACA GAG TGT GAT ATC TAC CCG CTT CGC GTC GGCAla Lys Ser Gln Thr Glu Cys Asp Ile Tyr Pro Leu Arg Val Gly      820          830          840           850ATC CGG TCA GTG GCA GTG AAG GGC GAA CAG TTC CTG ATT AAC CACIle Arg Ser Val Ala Val Lys Gly Glu Gln Phe Leu Ile Asn His   860          870           880          890          900AAA CCG TTC TAC TTT ACT GGC TTT GGT CGT CAT GAA GAT GCG GACLys Pro Phe Tyr Phe Thr Gly Phe Gly Arg His Glu Asp Ala Asp      910          920          930           940TTG CGT GGC AAA GGA TTC GAT AAC GTG CTG ATG GTG CAC GAC CACLeu Arg Gly Lys Gly Phe Asp Asn Val Leu MET Val His Asp His   950          960          970           980          990GCA TTA ATG GAC TGG ATT GGG GCC AAC TCC TAC CGT ACC TCG CATAla Leu MET Asp Trp Ile Gly Ala Asn Ser Tyr Arg Thr Ser His     1000         1010         1020          1030TAC CCT TAC GCT GAA GAG ATG CTC AAC TGG GCA GAT GAA CAT GCCTyr Pro Tyr Ala Glu Glu MET Leu Asn Trp Ala Asp Glu His Gly  1040         1050         1060          1070         1080ATC GTG GTG ATT GAC GAA ACT GCT GCT GTC GGC TTT AAC CTC TCTIle Val Val Ile Asp Glu Thr Ala Ala Val Gly Phe Asn Leu Ser     1090         1100         1110          1120TTA GGC ATT GGT TTC GAA GCG GGC AAC AAG CCG AAA GAA CTG TACLeu Gly Ile Gly Phe Glu Ala Gly Asn Lys Pro Lys Glu Leu Tyr  1130         1140         1150          1160         1170AGC GAA GAG GCA GTC AAC GGG GAA ACT CAG CAA GCG CAC TTA CAGSer Glu Glu Ala Val Asn Gly Glu Thr Gln Gln Ala His Leu Gln     1180         1190         1200          1210GCG ATT AAA GAG CTG ATA GCG CGT GAC AAA AAC CAC CCA AGC GTGAla Ile Lys Glu Leu Ile Ala Arg Asp Lys Asn His Pro Ser Val  1220         1230         1240          1250         1260GTG ATG TGG AGT ATT GCC AAC GAA CCG GAT ACC CGT CCG CAA GGTVal MET Trp Ser Ile Ala Asn Glu Pro Asp Thr Arg Pro Gln Gly     1270         1280         1290          1300GCA CGG GAA TAT TTC GCG CCA CTG GCG GAA GCA ACG CGT AAA CTCAla Arg Glu Tyr Phe Ala Pro Leu Ala Glu Ala Thr Arg Lys Leu  1310         1320         1330          1340         1350GAC CCG ACG CGT CCG ATC ACC TGC GTC AAT GTA ATG TTC TGC GACAsp Pro Thr Arg Pro Ile Thr Cys Val Asn Val MET Phe Cys Asp     1360         1370         1380          1390GCT CAC ACC GAT ACC ATC AGC GAC CTC TTT GAT GTG CTG TGC CTGAla His Thr Asp Thr Ile Ser Asp Leu Phe Asp Val Leu Cys Leu  1400         1410         1420          1430         1440AAC CGT TAT TAC GGA TGG TAT GTC CAA AGC GGC GAT TTG GAA ACGAsn Arg Tyr Tyr Gly Trp Tyr Val Gln Ser Gly Asp Leu Glu Thr     1450         1460         1470          1480CCA GAG AAG GTA CTG GAA AAA GAA CTT CTG GCC TGG CAG GAG AAAAla Glu Lys Val Leu Glu Lys Glu Leu Leu Ala Trp Gln Glu Lys  1490         1500          1510         1520         1530CTG CAT CAG CCG ATT ATC ATC ACC GAA TAC GCC GTG GAT ACG TTALeu His Gln Pro Ile Ile Ile Thr Glu Tyr Gly Val Asp Thr Leu     1540         1550         1560          1570GCC GGG CTG CAC TCA ATG TAC ACC GAC ATG TGG AGT GAA GAG TATAla Gly Leu His Ser MET Tyr Thr Asp MET Trp Ser Glu Glu Tyr  1580         1590          1600         1610         1620CAG TGT GCA TGG CTG GAT ATG TAT CAC CCC GCC TTT GAT CGC GTCGln Cys Ala Trp Leu Asp MET Tyr His Arg Ala Phe Asp Arg Val     1630         1640         1650          1660AGC CCC GTC GTC GGT GAA CAG GTA TGG AGT TTC CCC GAT TTT GCGSer Ala Val Val Gly Glu Gln Val Trp Ser Phe Ala Asp Phe Ala  1670         1680          1690         1700         1710ACC TCG CAA GGC ATA TTG CGC GTT GGC GGT AAC AAG AAA CGG ATCThr Ser Gln Gly Ile Leu Arg Val Gly Gly Asn Lys Lys Gly Ile     1720         1730         1740          1750TTC ACT CGC GAC CGC AAA CCG AAG TCG CCG GCT TTT CTG CTG CAAPhe Thr Arg Asp Arg Lys Pro Lys Ser Ala Ala Phe Leu Leu Gln  1760         1770          1780         1790         1800AAA CGC TGG ACT GGC ATG AAC TTC GGT GAA AAA CCG CAG CAG GGALys Arg Trp Thr Gly MET Asn Phe Gly Glu Lys Pro Gln Gln Gly     1810GGC AAA CAA TGAGly Lys Gln ---