[发明专利]高效表达乙肝表面S(主蛋白)和前S1(大蛋白)融合抗原的转基因哺乳动物细胞系无效
| 申请号： | 00123612.1 | 申请日： | 2000-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN1309181A | 公开（公告）日： | 2001-08-22 |
| 发明（设计）人： | 田淑芳;阮力;刘文军;杨芙蓉;宗芳;李军;陈红;王文;阮薇琴;王秀平 | 申请（专利权）人： | 中国预防医学科学院病毒学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/11;C12N15/62;C12N15/63;C12N15/74 |
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| 地址： | 100052 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 在乙肝表面抗原PreS1(21－47)基因片段与S基因的第223位相连的基础上在其下游引入RNA加聚A信号AATAA、乙肝病毒增强子1(En1)和增强子2(En2),及突变的x基因(mX)构成pCHBSS1G质粒。将pCHBSS1G质粒与pSV2dhfr质粒转化到CHO－dhfr－细胞,经克隆加MSX及MTX筛选扩增,获得了高效表达乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白的一系列基因工程细胞系(GdSS1－X),SS1融合蛋白在SDS－PAGE中显出27KD,30KD的蛋白条带,小鼠免疫可产生针对S和S1的特异性抗体。 | ||
| 搜索关键词： | 高效 表达 乙肝 表面 蛋白 s1 融合 抗原 转基因 哺乳动物 细胞系 | ||
【主权项】：
1．一种含有乙肝病毒adr亚型表面抗原S+S1融合基因的重组质粒pCHBSS1G，此质粒的结构特点是：复制方向从左至右，其排列顺序是PBR322的复制起点→CMV-1E的0.75kb的启动子→乙肝表面抗原S+S1融合基因SS1→增强子EN1,En2及使用缺失突变使X基因自ATG后第8位bp起缺失16个bp，从而失去表达X基因的可能，降低致癌性→SV40的复制起点，早期启动子→GS基因，此基因是从CHO-dhfr-细胞中经PCR获得的→SV40的多聚A位点；质粒结构中的乙肝表面抗原S+S1融合基因SS1在前，谷氨酰胺合成酶扩增基因GS在后，它们是分别在CMV立即早期启动子及SV40早期启动子的调控之下；乙肝表面抗原S+S1基因是前S1第21-47基因片段与S基因3’端的第223位相连的融合基因。
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