[发明专利]一种快速检测CpG胞嘧啶甲基化的方法无效
| 申请号： | 00129641.8 | 申请日： | 2000-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN1346054A | 公开（公告）日： | 2002-04-24 |
| 发明（设计）人： | 邓大君;周静 | 申请（专利权）人： | 北京市肿瘤防治研究所 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;C12N15/10 |
| 代理公司： | 中国商标专利事务所 | 代理人： | 万学堂 |
| 地址： | 100034 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及检测DNA胞嘧啶甲基化的方法,包括1)用亚硫酸氢钠处理部分待测样品DNA;2)根据目标片段处理前两端不含CpG的部位,设计2对引物,对处理前、后DNA进行PCR扩增;3)在未甲基化目标片段的tPCR产物的变性(解链)温度下测定样品tPCR产物的色谱保留时间;4)将tPCR产物保留时间明显延长样品目标片段的wPCR产物与野生型对照样品等量混合,进行变性和复性杂交处理,测定样品目标片段是否存在点突变。该方法能反映整个目标片段中CpG的胞嘧啶甲基化状态,简易、快速、成本低廉、准确。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 cpg 胞嘧啶 甲基化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测CpG胞嘧啶甲基化的方法，包括下列步骤：1〕用亚硫酸氢钠处理部分待测样品DNA；2〕根据目标片段处理前两端不含CpG的部位，分别设计2对引物，1对能够与处理前的目标片段配对，进行处理前目标片段的PCR扩增(wPCR)；另外1对引物能够与处理后的目标片段配对，进行处理后目标片段的PCR扩增(tPCR)；3〕用DHPLC在未甲基化目标片段的tPCR产物的部分变性(解链)温度下测定样品tPCR产物的色谱保留时间；4〕将tPCR产物保留时间明显延长样品目标片段的wPCR产物与野生型对照样品等量混合，进行变性和复性杂交处理，用DHPLC在wPCR产物的部分变性(解链)温度下测定样品目标片段是否存在点突变。
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