[发明专利]使用不同的核苷酸混合物的DNA测序方法和用于该方法的试剂盒无效
| 申请号： | 00803086.3 | 申请日： | 2000-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN1338004A | 公开（公告）日： | 2002-02-27 |
| 发明（设计）人： | 朴韩浯;俞在亨 | 申请（专利权）人： | 株式会社百尼尔 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 中原信达知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 丁业平,王维玉 |
| 地址： | 韩国忠*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本发明涉及采用双脱氧核苷酸介导的链终止反应的DNA核苷酸序列分析方法,更具体地讲,涉及通过一步分离步骤进行DNA序列分析的测序方法,所述DNA序列比可由常规桑格测序法所能分析的序列长度更长,该方法的特征在于采用其双脱氧核苷酸与脱氧核苷酸的摩尔比彼此不同的两种核苷酸的混合物来产生DNA片段。 | ||
| 搜索关键词： | 使用 不同 核苷酸 混合物 dna 方法 用于 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种采用双脱氧核苷酸介导的终止反应的DNA核苷酸序列分析方法，其特征在于包括：1)制备下列反应混合物的步骤其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比高于0.05的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；其中包括ddATP与dATP的摩尔比高于0.058的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比高于0.1的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；和其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比高于0.0033的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；2)制备下列反应混合物的步骤其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；其中包括ddATP与dATP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；和其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；3)分别向以上步骤1)和2)中制备的上述8种反应混合物中添加模板DNA和引物来产生互补DNA片段的步骤；4)将步骤3)中获得的互补DNA片段按照ddNTP的种类分别进行混合并按分子量顺序对如此制备的各互补DNA片段的混合物进行分离的步骤；5)通过识别如上分离的所述互补DNA片段的末端碱基来确定模板DNA核苷酸序列的步骤。
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