[发明专利]单核苷酸多态性(SNP)的简便快速的高温杂交芯片检测技术

摘要

本发明针对现有DNA寡核苷酸探针芯片检测基因组双链DNA单核苷酸多态性(SNP)的不足,对固定探针的设计、探针固定、DNA标记和杂交等过程进行了相应改进。1)使用高亲和力探针,并具有耐酸碱性、抗核酸酶和重复使用等优点;2)立体探针固定技术,增加探针的固定密度和被检DNA与探针的空间可近性;3)DNA直接标记技术,检测时将基因组DNA碎裂成50bp左右的片断,并应用生物素光化学直接标记技术;4)高温杂交技术,可以在比正常杂交温度高10度以上或较低离子强度的条件下进行杂交,避免靶DNA双链间的复性,显著提高杂交的效率。本发明使基因组DNA的多态性检测和突变检测更简便快速,可以在短至2小时内完成检测全过程。

主权项

1.本发明是一种涉及基因组DNA芯片高温杂交检测的技术，主要采用特殊高亲和力探针、探针立体固定、目标DNA的直接标记以及高温杂交等技术，提高杂交温度，减少溶液中DNA复性，同时缩短检测时间，本发明包括以下步骤：a.以肽核酸(PNA)或核糖戊环2′位修饰的RNA寡核苷酸等高亲和力探针代替一般DNA寡核苷酸探针，并阵列于DNA芯片表面，以增加探针的变性温度(Tm)和对核酸酶的抗性；b.探针立体固定技术，应用高分子交联物固定探针阵列，增加探针与目标DNA的空间可近性和探针固定密度；c.目标DNA片断(50～100bp)的直接荧光标记或生物素标记，免去DNA分离、纯化等过程；d.高温杂交和等离子杂交。