[发明专利]一种使用免疫PCR技术的红斑狼疮抗Sm抗体的检测方法无效
| 申请号： | 01106288.6 | 申请日： | 2001-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN1373364A | 公开（公告）日： | 2002-10-09 |
| 发明（设计）人： | 晏舒;曾常茜;尹学念;迟婉莉;李乃奚;栾莹莉 | 申请（专利权）人： | 吉化集团公司总医院 |
| 主分类号： | G01N33/53 | 分类号： | G01N33/53;G01N33/558 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 | 代理人： | 丁洪学 |
| 地址： | 132022 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 一种使用免疫PCR技术的红斑狼疮抗Sm抗体的检测方法。结合了抗原抗体反应的特异性与PCR扩增技术的优点。步骤是将SmAg抗原包被、封闭、加血清、加探针、加PCR混合物,在PCR扩增仪上扩增。再在水凝胶中电泳,经EB柒色,在紫外线反射透射仪上观察结果,照像。使用本发明的积极效果是不仅具有免疫反应的特异性,而且有PCR的高灵敏性,大辅度的提高抗Sm抗体检出率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 使用 免疫 pcr 技术 红斑狼疮 sm 抗体 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种使用免疫PCR技术的红斑狼疮抗Sm抗体的检测方法，其特征是：利用酶标软板，在每个孔中加入1∶1000～1∶2000(1000U/ml)稀释的SmAg100μl在37℃温度下1～2h；然后用洗涤液洗涤3次，每孔加50μl～200μl封闭液，在25～30℃温度下封闭30min～1h；取出后再用洗涤液洗涤3次，每孔加入100μl血清，37℃温育40min；取出后再洗涤3次，之后加入1∶1500～1∶2500稀释的SaHIgG-DNA探针100～200μl，37℃温育45min；取出，再洗涤3～5次，最后加入PCR反应混合物，覆盖70μl石蜡油，在PCR扩增仪上进行扩增，扩增条件为，预变性94℃2min再行94℃40sec，55℃40sec，72℃60sec共35个循环，继续72℃延伸5min；扩增后，取PCR扩增产物20μl加入到2％琼脂糖凝胶中电泳，经EB染色，在紫外反射透射仪上观察结果，照相；同时设PCR阳性对照，同上法进行PCR扩增。
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