[发明专利]桂竹香外膜蛋白基因克隆的方法无效
| 申请号： | 01106407.2 | 申请日： | 2001-01-02 |
| 公开（公告）号： | CN1362517A | 公开（公告）日： | 2002-08-07 |
| 发明（设计）人： | 李旭锋;刘天艳;王劲;袁旭 | 申请（专利权）人： | 成都天友发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 武汉科宏专利事务所 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 610041 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开一种桂竹香外膜蛋白基因克隆的方法,该方法包括下列步骤1)一步法提取桂竹香幼叶总RNA;2)利用RNA直接进行反转录;3)利用同源序列合成探针;4)用地高辛标记探针,噬菌斑原位杂交的方法筛选桂竹香苗期cDNA文库;5)利用PCR的方法快速确定阳性克隆是所筛选的重组子;6)限制酶切分析,Southern杂交分析确定为重组子;7)测序,并通过Bioinfomatics分析,确定该基因为新的未被克隆过的桂竹香外膜蛋白cDNA序列。本发明方法易行,操作简便,效果好。克隆出的桂竹香外膜蛋白的cDNA序列还可应用与研究桂竹香细胞的物质运输,信号传递和细胞代谢等。 | ||
| 搜索关键词： | 桂竹 膜蛋白 基因 克隆 方法 | ||
【主权项】：
1、一种桂竹香外膜蛋白基因克隆的方法，包括下列步骤：(1)一步法提取桂竹香幼叶总RNA；(2)利用总RNA直接进行反转录，并用LD-PCR方法构建桂竹香苗期cDNA文库；(3)利用同源序列设计并合成同源探针；(4)用地高辛标记同源探针，噬菌斑原位杂交方法筛选桂竹香苗期cDNA文库；(5)利用PCR的方法快速筛选并确定阳性克隆；(6)限制性酶切分析，Sourthen杂交分析确定为重组子；(7)测序，并通过Bioinfomatics分析，确定桂竹香外膜蛋白基因序列。
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