[发明专利]烷基化壳聚糖转基因复合物微粒的制备方法

摘要

本发明公开了一种烷基化壳聚糖转基因复合物微粒的制备方法。该方法包括烷基化壳聚糖的制备,及以其为载体与质粒DNA复合制备微粒,其特征在于以分子量40000－50000,脱乙酰度90%以上的壳聚糖分散在氢氧化钠和异丙醇混合溶剂中,并向该溶液中加入烷基化试剂反应,经洗涤等处理得到取代度达20－30%的烷基化壳聚糖,将烷基化壳聚糖及含有CAT报告基因的质粒DNA分别溶于醋酸/醋酸钠的溶液中,静置后,再把它们的溶液按壳聚糖的氨基摩尔数与DNA的磷酸酯基摩尔数比进行混合,静置过滤得到粒径80－100nm的复合物微粒。本发明采用的载体亲疏水性可调,无细胞毒性,在较低的电荷比下能与质粒DNA复合,并能抗核酸酶对DNA的降解,在相同的条件下转染率接近质子转染胺(lipofectamine)水平。

主权项

1.一种烷基化壳聚糖转基因复合物微粒的制备方法，该方法包括烷基化壳聚糖的制备，及以其为载体与质粒DNA复合制备微粒的两个步骤，其特征在于：以分子量40000-50000，脱乙酰度90％以上的壳聚糖分散在10-20％的氢氧化钠和异丙醇混合比1∶5的溶剂中，并向该溶液中加入溴丁烷或溴辛烷、溴代十二烷、溴代十六烷烷基化剂，其加入量为与壳聚糖氨基摩尔比为20-30％，在50-60℃下反应3-4小时，然后经洗涤、过滤、透析处理得到取代度达20-30％的丁基或辛基、十二烷基、十六烷基壳聚糖衍生物，把上述某一种烷基化壳聚糖以及含有CAT报告基因的质粒DNA分别溶于0.01-0.03M醋酸/0.01-0.03M醋酸钠的溶液中，静置1-2小时后，再把它们的溶液按壳聚糖的氨基摩尔数与DNA的磷酸酯基摩尔数1∶2进行混合，使它们的电荷比为1∶2-1∶6，静置过滤得到粒径80-100nm的复合物微粒。