[发明专利]应用PCR－SSCP－STR技术筛测21三体综合征的方法

摘要

本发明属于分子生物学。21三体综合征(又称先天愚型综合征)，是人类最常见的染色体病，现有的检测方法费时较长，技术要求高，不适合大规模的产前普查。本发明提出一种应用PCR－SSCP－STR技术筛查21三体综合征的方法，该方法敏感性强，准确率较高，且方法简便、快速，避免了复杂的手续，可作为大规模产前普查的方法。

主权项

1.一种应用PCR-SSCP-STR技术分子筛查21三体综合征的方法，其特征是应用短串联序列作遗传标记，在21三体综合征的关键区位选择STR位点，设计2对引物，通过聚合酶链反应，对这2对等位基因进行PCR扩增。具体步骤如下：1)、PCR扩增采用2针对D21S1411和D21S11的特异引物[3]PCR扩增21号染色体2个短串联重复位点(shorttandomrepeat，STR)，反应体系总体积50μl，含基因组DNA0.1μg，引物0.5μmol/L，dNTP100μmol/L，TaqDNA聚合酶2.0U，缓冲液5μl，最后加灭菌蒸馏水使反应体积为50μl。所有样品统一混合反应液分装，用灭菌矿物油覆盖。反应条件为：95℃变性5分钟，接着运行30个循环(95℃变性45秒钟-60℃退火35秒钟-70℃延伸45秒钟)，最后72℃延伸5分钟。引物序列为5’-atg-atg-aat-gca-tag-atg-gat-g-3’，5’-aat-gtg-tgt-cct-tcc-agg-c-3’，5’-tat-gtg-agt-caa-ttc-ccc-aag-tga-3’，5’-gtt-gta-tta-gtc-aat-gtt-ctc-cag-3’。2)、低离子强度(lowironicstrength，LIS)SSCP分析：参照文献[4]LIS-PCR-SSCP方法制备8％聚丙烯酰胺凝胶，0.5×TBE电泳缓冲液。将扩增产物2ul加入20ul1×LIS缓冲液混合，98℃变性5min，取10ul上样，25℃300V电压，预电泳15分钟，电泳分离5-9小时。电泳结束后，取下凝胶，放入1％冰乙酸中固定10分钟，然后放入0.2％硝酸银中染色20分钟，最后放入显色液(1.5氢氧化钠-0.4％甲醛)中显色。干胶。观察结果并照像。