[发明专利]多个多核苷酸拷贝的稳定基因组整合

摘要

位点特异性重组酶和通过重组的体内整合构建细胞的方法，在该细胞的染色体中包含编码至少一种目的多肽的可读框(ORF)或操纵子的一或多拷贝，每拷贝在异源启动子的转录控制下；实施所述方法的方式、所得的细胞和使用所得细胞生产目的多肽的方法。

主权项

1.构建细胞的方法，在该细胞的染色体中包含编码至少一种目的多肽的可读框(ORF)或操纵子的一个或多个拷贝，每个拷贝在异源启动子的转录控制下，所述方法包含下列步骤：(a)提供在其染色体中包含位点特异性重组酶的第一识别序列(RS1)的一个或多个拷贝的细胞，其中RS1的每个拷贝位于所述的异源启动子拷贝的下游；(b)将包含位点特异性重组酶的ORF或操纵子和第二识别序列(RS2)的多核苷酸构建体导入所述的细胞，其中RS2相对于ORF或操纵子定位和定向，使得RS2与细胞染色体中RS1拷贝的体内重组可以将所述的构建体整合入该染色体，并且将ORF或操纵子置于异源启动子的下游，并且与异源启动子相同取向；和(c)RS2与一个或多个RS1的拷贝在有位点特异性重组酶存在下重组，由此将ORF或操纵子的一个或多个拷贝整合入染色体并且置于下列条件下：(i)直接在异源启动子转录控制下；或(ii)在异源启动子的下游且与异源启动子相同方向，但用区将其分隔开，该区可以在一种或多种任选重组事件后切除，由此将所关注的ORF或操纵子置于异源启动子的转录控制下。