[发明专利]一种分离纯化嗜铁钩端螺旋菌的方法

摘要

一种分离纯化嗜铁钩端螺旋菌的方法，本发明从酸性矿坑水中分离嗜铁钩端螺旋菌，将采集的酸性矿坑水样品用无机盐液培养基在30℃条件下富集培养一代，然后将其传代用一种新的选择性液体培养基A－M培养，并在培养基A－M中添加MnSO₄1.0g/L，Al₂(SO₄)₃·18H₂O 2.1g/L，培养基pH值设为1.5－1.7，培养温度设为38－42℃；稀释传代培养后，在改良的单层固体培养基上均匀涂布。本发明只要用单层平板就能分离得到纯的嗜铁钩端螺旋菌，采用普通琼脂作凝胶剂，不需要添加任何其它细菌辅助分离，菌落形成率较高，较双层平板方法更简单易行。

主权项

1.一种分离纯化嗜铁钩端螺旋菌的方法，其特征在于包含以下步骤：(1)将采集的酸性矿坑水样品用无机盐液培养基富集培养一代，然后将其传代用一种新的选择性液体培养基A-M培养，选择性液体培养基A-M成分为：(NH4)2SO4 3g/L，KCl 0.1g/L，K2HPO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，Ca(NO3)0.01g/L，MnSO4 1.0g/L，Al2(SO4)3·18H2O 2.1g/L，FeSO4·7H2O 44.5-60.0g/L，培养基pH值为1.5-1.7，培养温度为38-42℃；(2)制作单层固体培养基平板 其配方由A，B和C三部分组成：A成分同于上述选择性液体培养基A-M成分：(NH4)2SO4 3g/L，KCl 0.1g/L，K2HPO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，Ca(NO3) 0.01g/L，MnSO4 1.0g/L，Al2(SO4)3·18H2O 2.1g/L，溶于400mL蒸馏水；B：普通琼脂10-15g溶于300mL蒸馏水；C：FeSO4·7H2O 44.5-60.0g/L，KSCN 15.5-25.0g/L溶于300mL蒸馏水；将A和B部分别在115-121℃蒸汽灭菌，时间20-30mins，最后将A，B和C三部分混合，调pH值至2.0-3.5，倒于平板上；(3)将步骤(1)所得培养物传代培养3～4次且每次稀释后传代，最后将处于对数生长期培养物取适量稀释20-100倍；取菌液均匀涂布在单层固体培养基上，涂有菌液的固体培养基平板先正置5～10分钟，待菌液吸收后倒置于36-45℃恒温培养箱培养，得到菌落。