[发明专利]检测乙型肝炎病毒cccDNA的巢式-实时定量PCR方法无效
申请号: | 200610043138.5 | 申请日: | 2006-07-10 |
公开(公告)号: | CN101104867A | 公开(公告)日: | 2008-01-16 |
发明(设计)人: | 白雪帆;王平忠;陈延平;黄长形;连建奇 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军第四军医大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/70 |
代理公司: | 西安慈源有限责任专利事务所 | 代理人: | 鲍燕平 |
地址: | 710038陕西省西*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | 本发明涉及乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)的巢式-定量PCR检测方法。具体检测步骤为:1)提取乙肝病毒DNA;2)设计、合成引物与探针:在HBV DNA负链缺口两侧选择保守区域设计内、外引物,Taqman荧光探针设计于负链缺口下游;3)Plasmid-SafeTMATP-DependentDNase酶切纯化;4)巢式-实时定量PCR扩增,包括:普通PCR——用外引物扩增纯化的模板和实时定量PCR——用内引物和荧光探针对普通PCR产物进行实时荧光定量扩增。本发明可同时提高检测反应的特异性和灵敏度,使操作过程和结果分析更加准确、简便和省时。 | ||
搜索关键词: | 检测 乙型肝炎 病毒 cccdna 实时 定量 pcr 方法 | ||
【主权项】:
1.检测乙型肝炎病毒cccDNA的巢式-实时定量PCR方法,包括以下检测步骤:1)提取乙肝患者的乙肝病毒DNA;2)设计合成引物与探针:在HBV DNA负链缺口两侧选择保守区域设计内、外引物,Taqman荧光探针设计于负链缺口下游,合成引物与探针;3)Plasmid-SafeTM ATP-Dependent DNase酶切纯化;4)巢式-实时定量PCR扩增:A.普通PCR用步骤2)中合成的外引物扩增纯化的模板;B.实时定量PCR用步骤2)中合成的内引物和荧光探针对A的产物进行实时荧光定量扩增;C.结果分析。
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