[发明专利]蜂毒肽的分离提纯方法

摘要

一种蜂毒肽的分离提纯方法，是将粗蜂毒用水浸洗，滤液用乙醇沉淀，沉淀物用氢氧化铵及正丁醇萃取，萃取液浓缩后以丙酮沉淀，沉淀物溶于脲的醋酸盐缓冲液A中，在离子交换凝胶柱上作梯度洗脱层析，柱下收集溶血活性最强吸收蜂V的层析馏份浓缩，浓缩液经葡聚糖凝胶G－10柱脱盐，丙酮沉淀，再溶解、脱盐沉淀处理，沉淀物溶于醋酸盐缓冲液B中，在葡聚糖凝胶G－25柱上以缓冲B液作梯度洗脱，柱下收集吸收蜂II时层析馏份浓缩、脱盐冷冻干燥即得到电泳级蜂毒肽。本发明工艺减化后生产周期缩短1.5～2天，蜂毒肽收率比现有方法提高7～8％，提纯成本降低约30％，实现了蜂毒肽的工业化生产。

主权项

1、一种蜂毒肽的分离提纯方法，是将粗蜂毒用水浸洗，溶媒萃取、凝胶过滤柱层析的方法，从蜂毒中提取蜂毒肽，其特征是：1)将粗蜂毒加水浸洗，去除不溶物杂质，滤液用乙醇沉淀，去除乙醇水液，沉淀物1加入氢氧化铵与正丁醇溶液萃取，弃除沉淀，蒸馏回收正丁醇，浓缩物加丙酮沉淀得沉淀物2；2)将沉淀物2溶解于脲的醋酸盐缓冲液A中，在离子交换凝胶CM-Sephrose.FF柱上，用缓冲液A梯度洗脱层析；3)在离子交换凝胶柱下收集溶血活性最强的吸收峰V时的层析馏份进行浓缩，浓缩液通过葡聚糖凝胶G-10柱脱盐，脱盐浓缩物用丙酮沉淀得到沉淀物3；4)将沉淀物3溶于盐酸胍、亚硫酸钠和对氯汞苯甲酸混合溶液中，再将溶液浓缩，通过葡聚糖凝胶柱脱盐，用丙酮沉淀得沉淀物4；5)将沉淀物4溶解于醋酸盐缓冲液B中，在葡聚糖凝胶G-25柱上，用缓冲液B梯度洗脱层析，在柱下收集溶血活性最强的吸收峰II时的层析馏份进行浓缩，于葡聚糖凝胶柱G-10上脱盐、冷冻干燥即得到蜂毒肽。