[发明专利]β天花粉蛋白的快速纯化及其结晶技术

摘要

本发明涉及β天花粉蛋白快速纯化及其结晶技术。天花粉原生材料去皮洗净，切碎，加缓冲液抽提，经阳离子交换树脂2次梯度洗脱，就可以获得β天花粉蛋白。β天花粉蛋白在柠檬酸缓冲液中以2M KCl为沉淀剂，可以长成β天花粉蛋白的正交晶体，晶体属于P2₁2₁2₁空间群，其晶胞参数为a＝38.244埃，b＝86.934埃，c＝135.785埃。本发明采用2步阳离子交换树脂洗脱技术，不经丙酮或硫酸铵分级沉淀及透析，冷冻干燥等步骤，就可以从天花粉蛋白原生材料中快速分离出β天花粉蛋白，避免了许多引起蛋白变性的繁琐操作；本发明还优选用于分离纯化的缓冲液浓度、pH值，洗脱梯度，提高了分离效果。

主权项

1.一种β天花粉蛋白的快速纯化技术，将天花粉原生材料去皮洗净，切碎，加5mM，pH4.5醋酸缓冲液抽提，匀浆，加50％冰醋酸调pH4.0，然后在4℃条件下，16000×g离心30min，上清液加样到20mM，pH4.5醋酸缓冲液平衡的强阳离子交换树脂的柱上，柱长要求在20cm以上，280nm实时检测，用20mM，pH4.5醋酸缓冲液洗至基线，再用20mM，pH6.5磷酸缓冲液洗至基线，然后用15-20倍柱床体积缓冲液缓梯度洗脱，一般会出3个峰；收集第2峰，用50％冰醋酸调pH4.0，加两倍体积的醋酸缓冲液，再用阳离子交换树脂进行梯度洗脱，即可获得β天花粉蛋白，其特征在于：在缓冲液抽提后，经过2步强阳离子交换柱梯度洗脱，就可以得到β天花粉蛋白。