[发明专利]一种蒜氨酸酶的一步分离纯化方法

摘要

一种蒜氨酸酶的一步分离纯化方法是，在温度为0－4℃的条件下，进行均浆、提取上清液、盐析、溶解、超滤而后制成新鲜大蒜的蒜氨酸粗液，把大蒜的蒜氨酸粗液采用Sephacryl S－200凝胶柱进行分离：并用pH6－8的缓冲液以10－60mL/h流速进行梯度洗脱，同时用紫外检测仪在280nm进行检测，收集洗脱液组分，再把它透析得到纯化的蒜氨酸酶。本发明用来分离纯化蒜氨酸酶的操作简便易行，使用本发明中的方法，可以根据需要分离纯化蒜氨酸酶量的多少装成不同大小的凝胶柱，以满足产业化生产的需要。

主权项

1.一种蒜氨酸酶的一步分离纯化方法，其特征是，在温度为0-4℃的条件下，按以下步骤完成：a、均浆：把新鲜的大蒜粉碎，按每千克新鲜大蒜加入800-1200mL pH6-8的缓冲液的量计算，在粉碎后的新鲜大蒜内加入缓冲液，同时进行搅拌使它们混合均匀；b、提取上清液：将经步骤a所得物质进行冷冻离心处理，而后提取上清液；c、盐析：在步骤b中提取的上清液内加入饱和硫酸胺溶液，加入同时进行搅拌；d、溶解：把经过盐析后得到的上清液做冷冻离心处理，而后去掉上清液，留下滤饼，再把滤饼重新溶于pH7的缓冲液内；e、超滤：把溶解后的滤饼用截留分子量为1万-5万的滤膜过滤，得到截留物，即为新鲜大蒜的蒜氨酸粗液；f、分离纯化：把制得的新鲜大蒜的蒜氨酸粗液采用Sephacryl S-200凝胶柱进行分离：并用pH6-8的缓冲液以10-60mL/h流速进行梯度洗脱，同时用紫外检测仪在280nm进行检测，收集洗脱液组分；再把它透析得到纯化的蒜氨酸酶。