[发明专利]胶体金标记蛋白A检测与SPA的FC片断相结合的哺乳动物血清中IgG总量的方法

摘要

胶体金标记蛋白A检测与SPA的FC片断相结合的哺乳动物血清中IgG总量的方法，包含下列步骤：1)对每一批制备金探针和微量反应板建立标准曲线算出回归方程：(1)设8个标准孔，每孔各加入50uL0.01M PH＝7.4TBS溶液(含0.1％小牛血清)。(2)加样：从第七孔中吸出50uL弃去，使之体积均为50uL，第八孔为空白对照；(3)在反应孔中加入稀释2－6倍50uL金探针，(4)将反应板充分混匀后置室温下作用20－40分钟。(5)用酶标仪在620nm处测每孔吸光度值；(6)将标准IgG引起的吸光度值的变化量取常用对数；2)样品测定，包含下列步骤：(1)在样品孔中，加入50uL样品溶液。(2)在样品孔中加入50uL稀释的金探针，(3)将反应板充分混匀后置室温下作用20－40分钟。(4)用酶标仪在620nm处测每孔吸光度值，根据标准曲线回归方程算出相应的IgG量。

主权项

1.胶体金标记蛋白A检测与SPA的FC片断相结合的哺乳动物血清中IgG总量的方法，包含下列步骤：1)对每一批制备胶体金标记蛋白A和微量反应板建立标准曲线算出回归方程，包含下列步骤：(1)设8个标准孔，每孔各加入50uL0.01M PH＝7.4 TBS溶液(含0.1％小牛血清)；(2)加样：第一孔加标准IgG溶液50uL，然后倍比稀释至第七孔，最后，从第七孔中吸出50uL弃去，使之体积均为50uL，第八孔为空白对照，每孔中标准IgG含量为160、80、40、20、10、5、2.5、0ug/mL；(3)在反应孔中加入稀释2-6倍50uL胶体金标记蛋白A；(4)将反应板充分混匀后置室温下作用20-40分钟；(5)用酶标仪在620nm处测每孔吸光度值，每个标准品的吸光度值减去空白孔吸光度值，即为加入标准IgG引起的吸光度值变化量；(6)将标准IgG引起的吸光度值的变化量取常用对数，将每孔中标准IgG含量取常用对数，用log-logit作图法建立标准曲线算出回归方程为x＝by+a，其中x是标准IgG含量常用对数，y是标准IgG引起的吸光度值的变化量的常用对数，a、b为算回归方程的常数；2)样品测定，包含下列步骤：(1)在样品孔中，加入50uL样品溶液；(2)在样品孔中加入50uL稀释的胶体金标记蛋白A；(3)将反应板充分混匀后置室温下作用20-40分钟；(4)用酶标仪在620nm处测每孔吸光度值，吸光度值减去该批制备的胶体金标记蛋白A和微量反应板建立标准曲线算出回归方程空白孔吸光度值，即为加入样品IgG引起的吸光度值变化量，将样品IgG引起的吸光度值的变化量取常用对数，根据标准曲线回归方程算出相应的IgG量；